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小阿屈

铜虫 (小有名气)

[交流] 不带荧光标记的质粒怎样验证是否成功转入了? 已有1人参与

质粒上有两个抗性基因,使用抗生素筛选一定特别准确么?怎么样验证才能最准确?

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peitaokong

银虫 (小有名气)


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双抗筛选是一方面,还有可以选择双抗筛选后做菌落pcr来进一步验证。
2楼2017-01-10 11:45:07
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小阿屈

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-10 11:45:07
双抗筛选是一方面,还有可以选择双抗筛选后做菌落pcr来进一步验证。

非常谢谢你,怎么做菌落PCR??我不是生物专业的,不是很清楚

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3楼2017-01-10 14:21:13
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peitaokong

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by 小阿屈 at 2017-01-10 14:21:13
非常谢谢你,怎么做菌落PCR??我不是生物专业的,不是很清楚
...

你的质粒上不是转有你的目的基因吗,你可以用pcr扩一下你的目的基因的序列。具体操作是你可以选择阳性菌落,挑取菌斑作为模板进行pcr检测。如果能够扩增出大小片段正确的条带,那就是说明重组质粒没有问题的。
4楼2017-01-11 10:24:06
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