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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 不带荧光标记的质粒怎样验证是否成功转入了？
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小阿屈

铜虫 (小有名气)

[交流] 不带荧光标记的质粒怎样验证是否成功转入了？ 已有1人参与

质粒上有两个抗性基因，使用抗生素筛选一定特别准确么？怎么样验证才能最准确？

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1楼 2017-01-10 11:32:44
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★
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双抗筛选是一方面，还有可以选择双抗筛选后做菌落pcr来进一步验证。
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2楼2017-01-10 11:45:07
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小阿屈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2017-01-10 11:45:07
双抗筛选是一方面，还有可以选择双抗筛选后做菌落pcr来进一步验证。

非常谢谢你，怎么做菌落PCR??我不是生物专业的，不是很清楚

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3楼2017-01-10 14:21:13
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 小阿屈 at 2017-01-10 14:21:13
非常谢谢你，怎么做菌落PCR??我不是生物专业的，不是很清楚
...

你的质粒上不是转有你的目的基因吗，你可以用pcr扩一下你的目的基因的序列。具体操作是你可以选择阳性菌落，挑取菌斑作为模板进行pcr检测。如果能够扩增出大小片段正确的条带，那就是说明重组质粒没有问题的。
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4楼2017-01-11 10:24:06
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