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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于烟草原生质体双荧光检测的问题
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xiaoz02

木虫 (小有名气)

[求助] 关于烟草原生质体双荧光检测的问题

各位虫友，我现在做烟草原生质体的转化，原生质体的分离用的是漂浮法，分离完了之后显微镜观察细胞的密度大约是10的四次方/mL，质量还可以，基本上没有破碎的。然后用40%的PEG6000，加上10-20ug的质粒DNA，还有50ug的小牛胸腺DNA一起共转，转化的质粒是双荧光素酶检测系统的萤火虫和海肾荧光素酶基因，暗培养了三天后用promega的双荧光检测试剂盒检测，基本上没有信号。大家帮我分析分析，哪里可能会出现问题啊？

关于烟草原生质体双荧光检测的问题
IMG_20170107_165728.jpg
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1楼 2017-01-10 09:36:40
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Neo2000

木虫 (著名写手)
直接注射烟草叶片就行了，何必那么麻烦做原生质体

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2楼2017-01-10 16:55:28
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xiaoz02

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2017-01-10 16:55:28
直接注射烟草叶片就行了，何必那么麻烦做原生质体

那注射了之后怎么检测萤火虫和海肾的荧光素酶活性呢？要提蛋白吗？
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3楼2017-01-10 18:51:10
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Neo2000

木虫 (著名写手)
检测粗提液即可，很灵敏的

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muyuan
4楼2017-01-10 19:43:45
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xiaoz02

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2017-01-10 19:43:45
检测粗提液即可，很灵敏的

好的，谢谢！
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5楼2017-01-11 09:02:25
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硫苏妖儿

木虫 (小有名气)

小菜鸟
你好 请问你做这个实验的时候 用的是酶标仪检测的还是什么仪器呢？还有你的reporter载体用的是什么载体呢？我也打算做这个实验，还在查这方面的实验，你做的事转录活性的检测  还是基因互作的检测呢？
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我不知道该写些什么
6楼2017-02-21 12:05:39
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 硫苏妖儿 at 2017-02-21 12:05:39
你好 请问你做这个实验的时候 用的是酶标仪检测的还是什么仪器呢？还有你的reporter载体用的是什么载体呢？我也打算做这个实验，还在查这方面的实验，你做的事转录活性的检测  还是基因互作的检测呢？

你这个不是一两个问题，可以留个QQ详聊，也可私信

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7楼2017-03-19 23:16:36
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muyuan

铁杆木虫 (著名写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2017-01-10 19:43:45
检测粗提液即可，很灵敏的

请问研磨好的粗提液可以室温放置多久，如果样品比较多，检测时间较长（需要1-2小时），会对结果有大的影响吗
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8楼2021-02-02 10:10:39
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