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小阿屈

铜虫 (小有名气)

[求助] 小白求助！怎么在一个质粒上面加荧光标记，荧光去哪儿找？买？ 已有2人参与

从没做过基因工程，只记得研一时候上过分子生物学课程，而且我也不算是生命学科的，是学植保，我有质粒图谱，序列，可是我想在我的质粒里加上荧光蛋白基因，也就是想检测出来，应该怎么做？求各位大神帮忙，说的越基础越好！跪谢！

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1楼 2017-01-09 17:17:19
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小阿屈

铜虫 (小有名气)
怎么没人理我，我觉得我这种问题对你们来说是小菜一碟呀

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2楼2017-01-09 17:23:34
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先确定要把荧光蛋白加到目的基因的N端还是C端，再重组到质粒中，你也可以买商品化的质粒，直接酶切链接就好。检测要用荧光显微镜。
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3楼2017-01-09 17:43:43
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做哈

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4楼2017-01-09 17:48:06
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小阿屈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljf0814 at 2017-01-09 17:43:43
先确定要把荧光蛋白加到目的基因的N端还是C端，再重组到质粒中，你也可以买商品化的质粒，直接酶切链接就好。检测要用荧光显微镜。

我有带抗性标记的质粒，连接在C，N端的区别是什么呢？我的目的就是想构建一个既有抗性标记也带荧光的质粒，然后把它转化到真菌里，然后去荧光显微镜下观察是否转入进去了。

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5楼2017-01-09 17:49:27
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小阿屈

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by star013 at 2017-01-09 17:48:06
我们可以做哈

怎么收费？

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6楼2017-01-09 17:50:14
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star013

新虫 (知名作家)
其实就是构建个载体的事

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7楼2017-01-09 17:54:37
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ljf0814

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小阿屈 at 2017-01-09 17:49:27
我有带抗性标记的质粒，连接在C，N端的区别是什么呢？我的目的就是想构建一个既有抗性标记也带荧光的质粒，然后把它转化到真菌里，然后去荧光显微镜下观察是否转入进去了。
...

因为一般的荧光蛋白比较大，连在基因的C或N端有可能会对基因编码的蛋白结构或功能产生影响，所以要确定连在哪一端不会造成影响。
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8楼2017-01-09 18:10:32
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些质粒上面有荧光基因，从上面PCR克隆下来。向别人要质粒或者买。
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9楼2017-01-10 11:22:24
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