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利用同尾酶双酶切的时候 需要注意什么？ 已有2人参与
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最近有个实验必须用xho1和sal1这对同尾酶进行双酶切，但是选了几个菌落结果都是空载体 有做过同尾酶酶切克隆的前辈吗， 想问问有关的经验 |
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2楼2017-01-13 10:37:00
【答案】应助回帖
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你的空载有两种情况： 1.空载是你是原始载体，那就是你载体切得太烂，如果是这种情况，建议你延长酶切时间，或者看看你的酶切位点中间序列上有没有单一 的酶切位点三酶切试试。切完后胶回收用1.0%的胶。 2.空载是由于同尾酶自连导致的，如果是这种情况的话，建议你在酶切的同时，用去磷酸化酶处理，这样能降低载体自连概率（这个地方要注意，载体去磷酸化，片段就不要去了，那要就彻底连不上了）。 以上这两种请况也很好分辨，你直接用你的XhoI和SallI酶切就可以了，如果能切动就是情况1，如果切不动就是情况2，当然还是测一下 你的酶切位点位置最准确。 或者建议你直接用重组的方法做，这样只要你在提切的不算太烂，重组臂位置没有什么重复序列，基本都是可以做上去的。 |
3楼2017-01-13 10:52:46