| 查看: 3957 | 回复: 2 | ||
[求助]
利用同尾酶双酶切的时候 需要注意什么？ 已有2人参与
|
|
最近有个实验必须用xho1和sal1这对同尾酶进行双酶切，但是选了几个菌落结果都是空载体 有做过同尾酶酶切克隆的前辈吗， 想问问有关的经验 |
回复此楼» 猜你喜欢
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
2楼2017-01-13 10:37:00
【答案】应助回帖
|
你的空载有两种情况： 1.空载是你是原始载体，那就是你载体切得太烂，如果是这种情况，建议你延长酶切时间，或者看看你的酶切位点中间序列上有没有单一 的酶切位点三酶切试试。切完后胶回收用1.0%的胶。 2.空载是由于同尾酶自连导致的，如果是这种情况的话，建议你在酶切的同时，用去磷酸化酶处理，这样能降低载体自连概率（这个地方要注意，载体去磷酸化，片段就不要去了，那要就彻底连不上了）。 以上这两种请况也很好分辨，你直接用你的XhoI和SallI酶切就可以了，如果能切动就是情况1，如果切不动就是情况2，当然还是测一下 你的酶切位点位置最准确。 或者建议你直接用重组的方法做，这样只要你在提切的不算太烂，重组臂位置没有什么重复序列，基本都是可以做上去的。 |
3楼2017-01-13 10:52:46