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douyaaya

金虫 (小有名气)

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[交流] 请问怎样测定蛋白质的OD值

由于样品量少，不适宜用福林酚等测定，所以老板建议直接测OD值，但我不知道怎么测，请各位高手帮忙！

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1楼 2008-12-11 20:18:24

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liubang8355

金虫 (小有名气)

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★ ★
asr(金币+2,VIP+0):thanks

1.吸收曲线的绘制:
用吸量管吸取2mL5.00mg/mL标准蛋白质溶液于10mL比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1cm石英比色皿，以0.9% NaCl溶液为参比，在190 nm～400nm区间，测量吸光度。
2. 标准曲线的制作：
用吸量管分别吸取0.5、1.0 、1.5、 2.0 、2.5  mL 5.00 mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中，用0.9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。用1 cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液的吸光度A278记录所得读数。
3. 样品测定：
   取适量浓度的待测蛋白质溶液3 mL，按上述方法测定278 nm处的吸光度。平行测定三份。