24小时热门版块排行榜    

查看: 241  |  回复: 3
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

swallow2007

木虫 (初入文坛)

[交流] 【蓝白斑筛选出现问题啊】+【有效期至2008年12月31日】

我需要将大约700bp的片段插入pMD19-T载体,后经蓝白斑筛选挑取阳性转化子PCR检测后送去测序.
现在出现的问题是取100微升菌液涂布平板后,16个小时之后才出现菌落,菌落中蓝斑较少,白斑较多且小,挑取单菌落经PCR检测后均为假阳性.
请高手指点!

[ Last edited by zzgyb on 2009-1-17 at 10:49 ]
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pissor

木虫 (正式写手)

★ ★
swallow2007(金币+1):谢谢参与
swallow2007(金币+1,VIP+0):Thanks!
   你最初蓝白斑筛选的那个板子还在吗?还在的话,挑取那个板子上的白斑,不用再涂板了,直接摇菌,然后提质粒,作酶切验证,应该不会有问题。因为白斑一般就是,PCR检测具有假阳性。
     你试试看吧。
游离在生存的边缘上,踯躅在科学的门外,溺死在知识的海洋中,转世在报恩的篱下。
3楼2008-12-12 12:47:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
swallow2007(金币+1):谢谢参与
swallow2007(金币+1,VIP+0):可能是这个原因吧
酶连有问题,涂布加抗性
帮助虫友,提升自己
2楼2008-12-12 00:42:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenlanf

铜虫 (小有名气)

★ ★
swallow2007(金币+1):谢谢参与
sanko211(金币+1,VIP+0):感谢热心的虫子^_^斑竹奖励
我以前实验也出过这个问题的
如果白斑比蓝斑小很多,而且多且密的话,可能就不是你想要的目标菌,而是一些卫星菌落或者杂菌。
这样的情况说明你的酶连和转化效率都不高
建议改变下连接体系,另外使用转化效率较高的感受态细胞
希望对你有帮助
4楼2008-12-12 13:50:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +6 启萌科技 2026-08-12 21/1050 2026-08-14 19:48 by 启萌科技
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +8 a089 2026-08-07 8/400 2026-08-14 18:46 by beefly
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见