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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)

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[求助] 多糖糖含量上不去，求帮忙已有1人参与

本人做多糖分离纯化，然后做得多糖样品经过DEAE后得到一个中性多糖，HPLC显示为一个对称的单峰。但是用苯酚-硫酸法测糖含量测定只有70%多。做过蛋白测定、多酚测定都没有。然后把它过P-10、S-400、Sepharose CL 6B等分子筛，收集峰尖，冻干之后测糖含量还是只有80%多，想知道为什么过了分子筛之后糖含量还是上不去。有什么好的方法可以增加我的糖含量么？
另外，做多糖的单糖组成，用PMP柱前衍生做的，响应值结果也特别低。同一批做的其他的糖响应值就高，我的样品重复三次还是低，希望大家能帮我解决这个问题。附PMP图

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1楼2017-01-04 14:03:42

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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

多糖纯化，用了DEAE和分子筛，纯度依然不高，有这几个原因。一是你离子交换纯化中洗杂不彻底，可以增加洗杂柱体积和时间，洗脱流动相及洗脱方式可以再优化，放缓梯度等洗脱提高分辨率；二是你用排阻介质的时候上样量，柱体积这些也要注意，一般来说，上样体积是柱体积的25%~40%，可以达到较好的分离。祝你顺利。