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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 多糖糖含量上不去，求帮忙
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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖糖含量上不去，求帮忙 已有1人参与

本人做多糖分离纯化，然后做得多糖样品经过DEAE后得到一个中性多糖，HPLC显示为一个对称的单峰。但是用苯酚-硫酸法测糖含量测定只有70%多。做过蛋白测定、多酚测定都没有。然后把它过P-10、S-400、Sepharose CL 6B等分子筛，收集峰尖，冻干之后测糖含量还是只有80%多，想知道为什么过了分子筛之后糖含量还是上不去。有什么好的方法可以增加我的糖含量么？
另外，做多糖的单糖组成，用PMP柱前衍生做的，响应值结果也特别低。同一批做的其他的糖响应值就高，我的样品重复三次还是低，希望大家能帮我解决这个问题。附PMP图

多糖糖含量上不去，求帮忙
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多糖糖含量上不去，求帮忙-1
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1楼 2017-01-04 14:03:42
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you5056

新虫 (初入文坛)
楼主要做结构吧？同路人纯度要上去才能做结构呢

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4楼2017-01-07 00:48:21
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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 天龙禅唱 at 2017-03-14 14:53:50
楼主向你请教一下多糖含量计算的问题，我现在建了标曲，样品溶液在490nm下测了吸光度，然后怎么换算啊，有没有具体步骤啊

你样品浓度多少？标准品浓度多少？我们一般标准品浓度0.1mg/ml，样品浓度1mg/ml，然后做的时候样品稀释10倍，就是0.1mg/ml，所以样品浓度和标准品浓度一致。把你测出来的吸光度带入到你的标准曲线里面得出的数据乘以100%就是你的糖含量
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9楼2017-03-22 11:30:58
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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)
求帮忙
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2楼2017-01-04 21:47:26
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剑客

木虫 (知名作家)
不懂啊，还想向你学习呢

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3楼2017-01-05 00:16:09
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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by you5056 at 2017-01-07 00:48:21
楼主要做结构吧？同路人纯度要上去才能做结构呢

是的呢，但是一直弄不上去，同路人有建议么？
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5楼2017-01-12 21:00:50
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vanvan

木虫 (小有名气)
你们测多糖是用苯酚硫酸法手测的吗？还是有什么检测器？我在做米酒多糖的分离，用DEAE 分离完后得到两个组分，组分1进一步用sepharose G-100分离后一直分不开，这种情况该怎么办
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机遇与挑战并存,梦想与困难共生
6楼2017-02-21 15:54:12
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lovely_sindy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by vanvan at 2017-02-21 15:54:12
你们测多糖是用苯酚硫酸法手测的吗？还是有什么检测器？我在做米酒多糖的分离，用DEAE 分离完后得到两个组分，组分1进一步用sepharose G-100分离后一直分不开，这种情况该怎么办

我是用苯酚硫酸法测得。现在也有在线糖含量检测仪，只是我还是老方法。你通过DEAE分离得到的组分可以用液相测一下分子量，然后选择合适的分子筛，你分不开来可能分子筛的分离范围不对。
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7楼2017-03-02 10:56:20
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天龙禅唱

新虫 (小有名气)
楼主向你请教一下多糖含量计算的问题，我现在建了标曲，样品溶液在490nm下测了吸光度，然后怎么换算啊，有没有具体步骤啊
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8楼2017-03-14 14:53:50
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桑庭vip

铜虫 (小有名气)
楼主啊，我的多糖还没有做到你这个步骤也不懂啊，，，希望接下来能向你请教！
请问楼主的deae用哪个厂家啊
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10楼2017-06-07 09:51:26
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