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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

[求助] 质粒中一部分测序,但是杂峰太多,影响结果。 已有1人参与

对原始载体(质粒)进行酶切连接,再转化。转化以后,挑取单菌落,提取质粒(用试剂盒提取)。

在送检测序前,用关于插入片段的forward和reverse引物检测插入片段是否在该质粒内。如果有,再把样品送去测序。

测序结果,有很多杂峰,即很多N,即使在序列中段,也时不时出现一小串N。


请问,这样的话是什么原因?有什么建议可以避免这样的现象。
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钱塘幼麟

木虫 (著名写手)

顶一下!!!
2楼2017-01-03 16:08:04
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小静儿000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
钱塘幼麟: 金币+3, 有帮助, 我觉得还是单菌落 2017-01-10 11:15:02
钱塘幼麟: 金币+5, 有帮助 2017-01-15 15:27:34
你挑斑的时候挑的可能不是单克隆,菌检建议你用载体上通用引物,如果实在不行你就换一种克隆方法,可以试试诺唯赞家的同源重组克隆试剂盒,可能就做出来了
3楼2017-01-04 11:25:15
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