| 查看: 1818 | 回复: 16 | |||
[交流]
询问有关引物设计方面的问题
|
|||
|
问有关引物设计方面的问题？ （1）请问引物的Tm值及GC含量的计算是用已经加了酶切位点及保护碱基的引物来计算吗？ （2）所说的引物长度也包含了酶切位点及保护碱基吗？ （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列吗？ （4）酶切位点的保护碱基是要在酶切位点两端都要加吗？ 请大家帮忙解答一下，谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有227人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
8楼2017-01-01 22:18:41
9楼2017-01-01 22:22:46
10楼2017-01-01 22:22:56
11楼2017-01-01 22:25:32
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
Tm值和GC含量，我一般加酶切位点和不加酶切位点都看，只要Tm值一度以内就可以。保护碱基根据实际情况吧，可以加也可以不加吧。 发自小木虫Android客户端 |
12楼2017-01-01 22:29:01
13楼2017-01-01 22:35:23
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
你的第四个问题，有歧义，如果加的话，就要加在酶切位点的外侧，靠近原序列那测不能加。因为有的酶需保护碱基提供位置支撑点，所以最好加上。 发自小木虫IOS客户端 |
14楼2017-01-02 09:11:15
15楼2017-01-02 15:15:13
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
（1）请问引物的Tm值及GC含量的计算是用已经加了酶切位点及保护碱基的引物来计算吗？ 一般是加酶切位点及保护性碱基前的Tm值和GC含量。 （2）所说的引物长度也包含了酶切位点及保护碱基吗？ 不知道你指的是什么时候的引物长度，如果试验对设计引物长度有要求，应该就不包括酶切位点及保护性碱基。 （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列吗？ kozak序列应该是只需加在上游引物的5'端就行。 （4）酶切位点的保护碱基是要在酶切位点两端都要加吗？ 应该是看情况吧，我觉得如果是连加两个或以上酶切位点最好两端都加上吧，毕竟两个酶切位点离得太近对双酶切有一定影响，如 果只加一个酶切位点，我觉得就在一端加就行了，应该是加在5'端。 以上个人经验及理解，仅供参考！  |
16楼2017-01-03 11:39:56
17楼2017-01-03 21:03:32
简单回复
tan9142楼
2017-01-01 19:05
回复
贺夏(金币+1): 谢谢参与
dsctg3楼
2017-01-01 19:20
回复
贺夏(金币+1): 谢谢参与
playman4楼
2017-01-01 20:11
回复
贺夏(金币+1): 谢谢参与
1
青云丹鹤5楼
2017-01-01 20:22
回复
贺夏(金币+1): 谢谢参与
祝福
tzynew6楼
2017-01-01 22:01
回复
贺夏(金币+1): 谢谢参与
2017-01-01 22:11
回复
