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询问有关引物设计方面的问题
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问有关引物设计方面的问题？ （1）请问引物的Tm值及GC含量的计算是用已经加了酶切位点及保护碱基的引物来计算吗？ （2）所说的引物长度也包含了酶切位点及保护碱基吗？ （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列吗？ （4）酶切位点的保护碱基是要在酶切位点两端都要加吗？ 请大家帮忙解答一下，谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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8楼2017-01-01 22:18:41
9楼2017-01-01 22:22:46
10楼2017-01-01 22:22:56
11楼2017-01-01 22:25:32
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Tm值和GC含量，我一般加酶切位点和不加酶切位点都看，只要Tm值一度以内就可以。保护碱基根据实际情况吧，可以加也可以不加吧。 发自小木虫Android客户端 |
12楼2017-01-01 22:29:01
13楼2017-01-01 22:35:23
★
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你的第四个问题，有歧义，如果加的话，就要加在酶切位点的外侧，靠近原序列那测不能加。因为有的酶需保护碱基提供位置支撑点，所以最好加上。 发自小木虫IOS客户端 |
14楼2017-01-02 09:11:15
15楼2017-01-02 15:15:13
★
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（1）请问引物的Tm值及GC含量的计算是用已经加了酶切位点及保护碱基的引物来计算吗？ 一般是加酶切位点及保护性碱基前的Tm值和GC含量。 （2）所说的引物长度也包含了酶切位点及保护碱基吗？ 不知道你指的是什么时候的引物长度，如果试验对设计引物长度有要求，应该就不包括酶切位点及保护性碱基。 （3）kozak序列加在引物的什么位置？上下游引物都需要加kozak序列吗？ kozak序列应该是只需加在上游引物的5'端就行。 （4）酶切位点的保护碱基是要在酶切位点两端都要加吗？ 应该是看情况吧，我觉得如果是连加两个或以上酶切位点最好两端都加上吧，毕竟两个酶切位点离得太近对双酶切有一定影响，如 果只加一个酶切位点，我觉得就在一端加就行了，应该是加在5'端。 以上个人经验及理解，仅供参考！  |
16楼2017-01-03 11:39:56
17楼2017-01-03 21:03:32
简单回复
tan9142楼
2017-01-01 19:05
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贺夏(金币+1): 谢谢参与
dsctg3楼
2017-01-01 19:20
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playman4楼
2017-01-01 20:11
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青云丹鹤5楼
2017-01-01 20:22
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祝福
tzynew6楼
2017-01-01 22:01
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2017-01-01 22:11
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