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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 分类/鉴定 » 【哪位高手】跪求细菌 菌落Pcr 的快速、可靠的方法
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Jasur.A

新虫 (初入文坛)

[求助] 【哪位高手】跪求细菌 菌落Pcr 的快速、可靠的方法

跪求细菌 菌落Pcr 的、快速可靠的方法，求详细的步骤。    细节（基本方法？、细菌细胞壁的破碎？（用什么、浓度多少？用什么稀释？）、PCR体系成分？、核酸燃料浓度多少？，用什么稀释？、胶里加多少？、  通用引物浓度是多少？ 用什么稀释？、 PCR 程序怎么设置？ 、求大神帮忙！！ 谢谢！
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1楼 2016-12-31 01:24:29
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wentan0504

新虫 (初入文坛)
以前做过……用小枪头挑一些放到体系中去，pcr体系和之前扩增目的片段时完全一致，只是把模板变成菌液，不用破壁（大肠杆菌）

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2楼2017-01-01 01:49:06
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)
是的啊，菌液菌落都可以

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生活的理想就是理想的生活
3楼2017-01-01 09:52:55
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Jasur.A

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wentan0504 at 2017-01-01 01:49:06
以前做过……用小枪头挑一些放到体系中去，pcr体系和之前扩增目的片段时完全一致，只是把模板变成菌液，不用破壁（大肠杆菌）

我想知道具体方法?
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4楼2017-01-01 16:34:32
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Jasur.A

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xtcao668 at 2017-01-01 09:52:55
是的啊，菌液菌落都可以

具体步骤知道吗?
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5楼2017-01-01 16:36:19
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jianglin0116

新虫 (初入文坛)
细菌涂板，长成单菌落之后，用灭菌的小枪头挑取单菌落，蘸在液体培养基里面吸打混匀，37℃，270r培养3小时，然后吸取一微升作为模板，pcr体系可以25微升，也可以50微升，体系里包括模板，引物，dntp，mg离子，k离子，酶，buffer等，看你是用单酶还是用MIX，如果用MIX的话很方便，推荐擎科生物公司的低盐金牌，菌p很给力，体系构成是，模板一微升，上下游引物各一微升，剩余用金牌MIX补齐就可以了，程序要看你引物的Tm值确定退火温度，延伸时间要看你片段大小，擎科的金牌mix延伸速度很快，5-10s/kb，短片段半个多小时就可以扩出来

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6楼2017-01-13 10:57:59
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