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【哪位高手】跪求细菌 菌落Pcr 的快速、可靠的方法
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跪求细菌 菌落Pcr 的、快速可靠的方法，求详细的步骤。 细节（基本方法？、细菌细胞壁的破碎？（用什么、浓度多少？用什么稀释？）、PCR体系成分？、核酸燃料浓度多少？，用什么稀释？、胶里加多少？、 通用引物浓度是多少？ 用什么稀释？、 PCR 程序怎么设置？ 、求大神帮忙！！ 谢谢！ |
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2楼2017-01-01 01:49:06
xtcao668
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 20473.8
- 散金: 16
- 帖子: 1109
- 在线: 61.1小时
- 虫号: 481086
- 注册: 2007-12-17
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2017-01-01 09:52:55
4楼2017-01-01 16:34:32
5楼2017-01-01 16:36:19
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细菌涂板，长成单菌落之后，用灭菌的小枪头挑取单菌落，蘸在液体培养基里面吸打混匀，37℃，270r培养3小时，然后吸取一微升作为模板，pcr体系可以25微升，也可以50微升，体系里包括模板，引物，dntp，mg离子，k离子，酶，buffer等，看你是用单酶还是用MIX，如果用MIX的话很方便，推荐擎科生物公司的低盐金牌，菌p很给力，体系构成是，模板一微升，上下游引物各一微升，剩余用金牌MIX补齐就可以了，程序要看你引物的Tm值确定退火温度，延伸时间要看你片段大小，擎科的金牌mix延伸速度很快，5-10s/kb，短片段半个多小时就可以扩出来 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2017-01-13 10:57:59