24小时热门版块排行榜    

查看: 1556  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

[求助] 新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙! 已有4人参与

预实验,跑了目的基因和内参基因。用的SYBR-Green,设置35个cycles,看熔解曲线还可以,但是为什么目的基因的平台期没有出来,只有Ct值。这是怎么回事呀。。。 跑的20ul体系,cDNA, SYBR-Green, (上下游)引物的比例1:2:1,即5ul ,10ul, 5ul。今天设置了40个循环又跑了一次,但是还是没到平台期。

新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙!
20161223扩增曲线.jpg


新手,定量PCR出现下列问题,完全不懂,求大神帮忙!-1
20161223熔解曲线.jpg
回复此楼
大家交流交流吧~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
20楼: Originally posted by lightdream at 2017-01-05 10:23:20
但是从我这个扩增曲线来看,只露了一点点头,完全不知道是正常还是不正常啊。。。。...

10μM的引物我们就加0.4,你确实加的太多了。模板有没有稀释呢,可能基因丰度低起峰晚,如果稀释了可以不稀释,但不能超过总体系的1/10,另外循环数可以增加到40最多45,循环数多了也会增加非特异性扩增,如果可看到是S型扩增的趋势也是可以的
21楼2017-01-05 11:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-30 07:43:00
你可以把你的图像参数修改一下,把X轴和Y轴的显示范围调大一些看看,我觉得你的扩增曲线是没有什么问题的,不用担心。
3楼2016-12-29 16:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
循环数不够,后期的扩增曲线就没有了。
4楼2016-12-29 21:52:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lightdream

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 16:33:10
你可以把你的图像参数修改一下,把X轴和Y轴的显示范围调大一些看看,我觉得你的扩增曲线是没有什么问题的,不用担心。

可是设置了跑多少个循环X轴就到多少呀。。。
大家交流交流吧~
5楼2017-01-03 16:11:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见