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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神，这样的RNA能不能继续做荧光定量
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小灿长大

新虫 (小有名气)

[求助] 求助大神，这样的RNA能不能继续做荧光定量 已有1人参与

用试剂盒提取柑橘叶片的RNA，测出来的浓度较低，电泳结果如图所示，现在反转录成CDNA，用内参引物跑PCR，如图，请教各位大神，这样的RNA质量能否用来做荧光定量，还请有经验的大神多多指导！谢谢！

求助大神，这样的RNA能不能继续做荧光定量
CDNA.JPG


求助大神，这样的RNA能不能继续做荧光定量-1
RNA.JPG
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1楼 2016-12-29 16:10:59
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小灿长大: 金币+2, ★有帮助 2016-12-29 16:32:38
你的RNA质量提的还是可以的，做定量pcr当然可以了。
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2楼2016-12-29 16:28:05
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小灿长大: 金币+2, ★有帮助 2016-12-29 16:34:57
看着第一个电泳图，我觉得有两种可能一种是你的反转录出了问题，第二种，是你的反转录后用cDNA扩pcr出了问题。我觉得你应该从这两方面找找原因
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3楼2016-12-29 16:31:04
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小灿长大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 16:28:05
你的RNA质量提的还是可以的，做定量pcr当然可以了。

您好，请问一下这个RNA的浓度比较低，对后面的影响大不大
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4楼2016-12-29 16:33:22
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小灿长大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 16:31:04
看着第一个电泳图，我觉得有两种可能一种是你的反转录出了问题，第二种，是你的反转录后用cDNA扩pcr出了问题。我觉得你应该从这两方面找找原因

请问我的CDNA跑出来的上面拖尾的是什么呢
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5楼2016-12-29 16:35:27
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小灿长大: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-12-29 20:22:00
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小灿长大 at 2016-12-29 16:33:22
您好，请问一下这个RNA的浓度比较低，对后面的影响大不大...

你的RNA浓度是多少，跑RNA电泳的时候加了多少μL
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6楼2016-12-29 16:39:03
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小灿长大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 16:39:03
你的RNA浓度是多少，跑RNA电泳的时候加了多少μL...

1号和2号的浓度120左右，3、4的浓度30-40.跑电泳是加了5微升
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7楼2016-12-29 19:05:18
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peitaokong

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小灿长大 at 2016-12-29 19:05:18
1号和2号的浓度120左右，3、4的浓度30-40.跑电泳是加了5微升...

你可以选择用20μL的体系进行反转录，上样500ng的RNA，1号和2号这种浓度低都加10μL，按照这种方法进行反转录。
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8楼2016-12-29 20:04:21
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小灿长大

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-29 20:04:21
你可以选择用20μL的体系进行反转录，上样500ng的RNA，1号和2号这种浓度低都加10μL，按照这种方法进行反转录。...

好的我明天在试一下，谢谢
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9楼2016-12-29 20:19:29
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wt棒棒糖

新虫 (小有名气)
可以啊

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心 静 自 然 凉
10楼2020-02-14 10:56:03
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