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112976553

金虫 (小有名气)

[交流] 关于RT-PCR的几个问题

首先是这几个试剂是什么:
SuperscriptllTM逆转录酶
无RNase活性的Dnase1
人胎盘RNAase抑制剂
哪有有卖的啊,价格大概多少。

还有RNA的提取要注意什么,我做的是大鼠海马内PSD95蛋白表达量的变化,有没有哪位大侠做相关的东西的,加我交流一下哦

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112976553

金虫 (小有名气)

2楼2008-12-10 21:16:24
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112976553

金虫 (小有名气)

3楼2008-12-10 21:16:37
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
这些东东在Reverse Transcription Kit中都有的
SuperscriptllTM逆转录酶: 就是反转录酶啊,依赖于RNA的DNA聚合酶;
无RNase活性的Dnase1:用于降解RNA中混入的DNA;
人胎盘RNAase抑制剂: 抑制RNase的活性。
我用的是Promega的Reverse Transcription Kit。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
4楼2008-12-11 12:41:20
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112976553

金虫 (小有名气)

了解了,谢谢大侠
5楼2008-12-12 10:04:29
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forget1997

银虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
SuperscriptllTM:  invitrogen的逆转录酶的商品名
无RNase活性的Dnase1:有人喜欢用。但是个人觉得用这个酶处理RNA,一样会降解80%的RNA (30min),所以不建议用。PCR的时候,把引物放在不同exon即可避免DNA的污染。
人胎盘RNAase抑制剂:加入RT的反应体系,抑制RNA酶

反转录试剂各个公司都有,包括promega,invitrogen、applied biosystems,stratagene。
推荐invitrogen。
买个kit,里面啥都有。

RNA提取可以用trizol或者RNeasy kit。
提的时候用RNaseZap或者RNaseAWAY擦枪、管子外壁、板子、台面,去除RNease活力。
其他就没啥了。按着说明书上做就是。
6楼2008-12-15 08:13:28
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