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11哈哈

新虫 (初入文坛)

[求助] DEAE-sepharose CL-6B 用过一次为什么是絮状的啊 已有1人参与

我最近纯化蛋白,用的DEAE-sepharose CL-6B,用过一次之后发现,填料跟絮状东西似的,不知道正不正常,难道是填料溶胀吗,请大神指教,万分感谢
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qingxiayuan

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【答案】应助回帖

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11哈哈: 金币+2, 有帮助 2016-12-30 14:57:43
填料的状态和所处的溶剂有很大关系,在水里会是絮状的,在盐溶液里会沉降的比较好
2楼2016-12-29 14:22:07
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11哈哈

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by qingxiayuan at 2016-12-29 14:22:07
填料的状态和所处的溶剂有很大关系,在水里会是絮状的,在盐溶液里会沉降的比较好

首先谢谢你,可我还是有些疑惑,我的填料买的液体的,说明上说洗去酒精可以直接用,装填料时是颗粒状的,可是用了一天之后,卸下来加上水就变成絮状的了,在整个过柱子的过程中,都是用的不同浓度的氯化钠溶液梯度洗脱,或是用缓冲溶液洗脱,难道就是因为我最后卸下后用水融了,多以才变成絮状的了吗?有没有可能是长菌了?这样对填料的性能有没有影响啊,请大神指教
3楼2016-12-30 14:48:06
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qingxiayuan

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3楼: Originally posted by 11哈哈 at 2016-12-30 14:48:06
首先谢谢你,可我还是有些疑惑,我的填料买的液体的,说明上说洗去酒精可以直接用,装填料时是颗粒状的,可是用了一天之后,卸下来加上水就变成絮状的了,在整个过柱子的过程中,都是用的不同浓度的氯化钠溶液梯度 ...

是的,就是颗粒状的,保存在乙醇里,用不同浓度氯化钠洗脱,才用一天不可能长菌啊。我洗的时候如果是水也是絮状的,加的是氯化钠的话就是颗粒状的

发自小木虫Android客户端
4楼2016-12-30 18:04:13
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11哈哈

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by qingxiayuan at 2016-12-30 18:04:13
是的,就是颗粒状的,保存在乙醇里,用不同浓度氯化钠洗脱,才用一天不可能长菌啊。我洗的时候如果是水也是絮状的,加的是氯化钠的话就是颗粒状的
...

哦哦,谢谢啦 为什么会这样啊,对填料的性能会有影响吗
5楼2016-12-31 13:20:37
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qingxiayuan

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5楼: Originally posted by 11哈哈 at 2016-12-31 13:20:37
哦哦,谢谢啦 为什么会这样啊,对填料的性能会有影响吗...

我觉得是电荷的影响,个人认为不影响填料性能
6楼2016-12-31 14:53:19
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11哈哈

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6楼: Originally posted by qingxiayuan at 2016-12-31 14:53:19
我觉得是电荷的影响,个人认为不影响填料性能...

我今天试了一下,第一次用的时候分出来的峰稍有不同,第一次的小峰,这次没有了。
我现在用这个填料,用ph8.5的Tris-HCl,可是我的目标蛋白还是直接穿过,不能跟树脂结合,接下来,我打算增大ph值,可是不知道选什么缓冲溶液,大神你知道这个填料碱性缓冲溶液选什么比较好吗
7楼2016-12-31 22:11:09
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