24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 459  |  回复: 6
当前主题已经存档。

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 2.7kbp 基因一直无法扩增出来??

最近扩增了一个基因,大小2.7k,GC含量50%左右,用的是宝生物的LA酶,用过2x GC baffer和10X baffer2,退火温度从55度一直降到48度(引物退火温度设计为59度),延长时间用过3m和3.5m,但一直难以扩出带,有也就是很淡的带,大小正确,我再用这个做模板,还是扩不出来,这到底是什么原因呢,酶确认是好的,大家帮忙分析一下,这么长的片段应该不难啊!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
为什么大家都很喜欢takara的东西……
他们家的酶很差很差,我用过他们的Taq酶和内切酶,效果都太差劲了
换个酶绝对能出来
takara的我只用DNA marker、化学感受态、loading buffer
其他一概不用……
2楼2008-12-10 15:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

panqiuzhen

可以用长片段tag酶
3楼2008-12-10 20:24:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

to 3楼
他用的LA Taq就是long PCR用的
只是Takara的酶就是差劲~~~
2.7一点都不算长
4楼2008-12-10 23:00:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

touch down
帮助虫友,提升自己
5楼2008-12-10 23:03:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chuyinghao

铁杆木虫 (职业作家)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
在出现目的条带那个温度,调节dNTP mixture的镁离子浓度,镁离子浓度高会影响的!!!
6楼2008-12-10 23:09:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lixiaoyi1981(金币+2,VIP+0):相当有经验,建议有空的时候写一些心得和大家分享。谢谢
用下Promega的GoTaq,做普通PCR绝对够
需要一点保真度,用Invitrogen的Platium高保真Taq
普通克隆是够的了
当然要很高抱枕度的话,非PfuUltra2莫属
7楼2008-12-10 23:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员962cQt 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分,求调剂 +3 0857求调剂. 2026-03-24 3/150 2026-03-27 01:18 by 求知若渴lz
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +4 荷包蛋hyj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:39 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +17 RichLi_ 2026-03-25 17/850 2026-03-26 19:44 by plmuchong
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 材料与化工考研调剂 +10 孅華 2026-03-22 10/500 2026-03-26 15:40 by zzll406
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 11/550 2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见