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几种基本蛋白质浓度测定方法之比较
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1. 蛋白质定量测定方法的基本原理 （1） 紫外分光光度法 蛋白质分子终中所含的酪氨酸、色氨酸以及苯丙氨酸残疾的芳香族结构对紫外光有吸收作用。其最大吸收峰在280nm 附近。当蛋白质的质量浓度在0.1~1.0g/L之间时，其紫外吸收值与浓度成正比，可用作蛋白质定量测定。 （2） 双缩脲法 蛋白质含有多个肽键，可发生双缩脲反应，在碱性溶液中，蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，可在540nm比色测定。当蛋白质的质量浓度在1.0~10.0g/L之间时，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质相对分子质量及氨基酸组成无关。 （3） Folin-酚试剂法 这种方法是对双缩脲法的发展。蛋白质与碱性铜溶液中的二价铜离子络合使得肽键伸展，从而使暴露出的酪氨酸和色氨酸残基在碱性铜条件下还原磷钼酸-磷钨酸试剂（ Folin试剂）产生深蓝色，当蛋白质的质量浓度在0.02~0.5g/L之间时，其颜色的深浅与蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量成正比。 （4） 考马斯亮蓝法 考马斯亮蓝G-250具有红色和青色两种色调，在酸性溶液中游离状态下为棕红色。当它通过疏水作用与蛋白质结合后变成蓝色，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸的残基相结合。当蛋白质的质量浓度在0.05~0.5g/L之间时，在595nm下测定的吸光度与蛋白质浓度成正比。 |
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