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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 用Trizol提取拟南芥的RNA
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欢喵

新虫 (小有名气)

[求助] 用Trizol提取拟南芥的RNA 已有2人参与

嗨！
下面有2副图片，一个是提取的具体步骤，另一个是NanoDrop 2000测的OD值。问题：提取到的结果总是不好，不理想（看图就能知道）

用Trizol提取拟南芥的RNA


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1楼 2016-12-23 10:16:55
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欢喵

新虫 (小有名气)
用Trizol提取拟南芥的RNA-1

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2楼2016-12-23 10:17:18
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
仅从OD比值来判断RNA质量很片面，由于OD值容易受到很多因素干扰，比如PH。其实并不准。最靠谱的做法就是跑一下RNA电泳，这个浓度的RNA，你可以取出2-3μL加入loading buffer跑一下电泳，看看RNA的特征性条带，这样才最好。希望能够帮助你。
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3楼2016-12-23 12:51:45
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
拟南芥的RNA很好提取的，可以直接换一个RNA提取试剂盒，如果还用这个方法，在吸取上清夜时，不要吸取到下面的液体，宁可少吸。另外一个浓度偏低，应该是样品偏少，再有就是拟南芥成苗本身成分复杂，所以如果没必要的要求，就用幼苗提取

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不是优秀，而是不可替代
4楼2016-12-23 13:13:33
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欢喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-23 12:51:45
仅从OD比值来判断RNA质量很片面，由于OD值容易受到很多因素干扰，比如PH。其实并不准。最靠谱的做法就是跑一下RNA电泳，这个浓度的RNA，你可以取出2-3μL加入loading buffer跑一下电泳，看看RNA的特征性条带，这样才 ...

就是怕有杂质，跑电泳也跑不出来啊？我是怀疑我的方法不对头。

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5楼2016-12-23 14:00:33
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 欢喵 at 2016-12-23 14:00:33
就是怕有杂质，跑电泳也跑不出来啊？我是怀疑我的方法不对头。
...

如果电泳看不到28S 18S的特征性条带，那就说明你的RNA提取失败了。拟南芥用trizol提取这个方法是没有问题的。你可以取50mg到100mg叶片，液氮研磨充分，加trizol充分振荡后，室温静置15mins，之后加入氯仿，这个充分振荡，静置5mins。异丙醇沉淀延长到一个小时。希望能够对你有所帮助。
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6楼2016-12-23 14:07:31
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欢喵

新虫 (小有名气)
你真有耐心，谢啦啊！不知该怎么称呼的好人

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7楼2016-12-23 14:14:37
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小石头IX

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 欢喵 at 2016-12-23 10:17:18

第三步后，确定不需要离心取上清，弃沉淀吗？？
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8楼2017-01-03 11:09:32
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欢喵

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小石头IX at 2017-01-03 11:09:32
第三步后，确定不需要离心取上清，弃沉淀吗？？...

是的，我在做的时候的确是没有离心，而直接往下做了，目的是使其分层

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9楼2017-01-03 12:34:06
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