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我叫刘小牛儿

新虫 (初入文坛)

[求助] 半定量跑不出目的片段 求大神支招已有3人参与

结果如图所示

半定量跑不出目的片段   求大神支招


半定量跑不出目的片段   求大神支招-1


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我叫刘小牛儿

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小蘑菇cc at 2016-12-23 01:18:04
你这个程序没有延伸时间就直接终延伸? 半定量引物最好设到300左右 这样不会跟二聚体混在一起 而且感觉引物特异性不好 扩增出来的很像二聚体 可以重新设计引物试试

有延伸   72度 30s     写的时候忘记了  我想问一下   这个跟模板有关系吗    我的这些引物  之前做过实时荧光定量   不知道为什么做半定量做不出来

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4楼2016-12-23 07:20:28
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小蘑菇cc

新虫 (初入文坛)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-23 07:40:54
你这个程序没有延伸时间就直接终延伸? 半定量引物最好设到300左右 这样不会跟二聚体混在一起 而且感觉引物特异性不好 扩增出来的很像二聚体 可以重新设计引物试试

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2楼2016-12-23 01:18:04
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peitaokong

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
你先要确保你的反应程序是正确的,其次你的反应体系,我看着应该是有问题的。反应体系中应该有buffer 镁离子 dNTP这几个东西都是相对固定的,也是保证酶能够发挥作用的,我看你加了5μL的酶,没有dNTP,相当于没有原材料,PCR怎么可能会有东西呢。没有buffer和镁离子,酶的工作环境是没有办法保证的。酶也不能加那么多。希望能够帮到你。
5楼2016-12-23 08:05:56
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个体系写得不详细,酶的用量太大了,可以尝试降低下退火温度。
6楼2016-12-23 09:42:43
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