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提剑的书生

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[求助] 260/230最高有2.3是为什么？已有2人参与

用的百泰克试剂盒提取的RNA，测浓度的时候发现260/230很高，听说这个试剂盒很容易导致这样的结果，烦请各位帮忙解释一下吧，谢谢啦。

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1楼 2016-12-22 17:21:35

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peitaokong

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我觉得你首先要明白吸光度各个参数的意义
280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。
A230 测定其它碳源物质，如酚，糖类等；
A260 是核酸的吸收峰测 RNA 和 DNA，引物等的浓度用的；A260*40ng/μL这个值就是RNA的浓度，DNA A260*50ng/μL这个值就是DNA的浓度。
A280 是蛋白质的吸收峰。
一般的，我们只看 OD260/OD280（Ratio，R）——1.8~2.0时，我们认为 RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当用 Tris 作为缓冲液检测吸光度时，R 值可能会大于 2（一般应该是<2.2的）。当 R<1.8时，溶液中蛋白或者其他有机物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当 R>2.2时，说明 RNA 已经水解成单核酸了。纯RNA 的A260/A280的比值为 2.0。
OD260/OD230的比值还表明 RNA 的纯度——其值 <2.0 表明裂解液中有亚硫氰胍和β-巰基乙醇残留，其值 >2.4，需用乙酸盐，乙醇沉淀 RNA。