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小小鸟fq

新虫 (正式写手)

[求助] Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝

关于actin染色的求助。我使用的是Actin-Tracker Green (微丝绿色荧光探针),Beyotime的。细胞是人肾上皮细胞癌。普通倒置显微镜下观察细胞状态还不错。
下面是我的操作步骤:
铺板  在共聚焦玻片上铺细胞过夜
清洗  预热PBS 3x2min
固定  冰4%多聚甲醛20min 室温
清洗  预热PBS 3x2min
通透 0.1%Triton 10min 室温
清洗  预热PBS 3x2min
染色  30min室温 避光(beyondtime actin tracker ,1:100;Hoechst 1:10000)
清洗  预热PBS 3x2min 避光
封片防淬灭剂 指甲油 避光 4度保存,第二天 共聚焦显微镜观察
片子染出来是整个细胞都是点状的,有一种细胞甚至还是小泡,显微镜下拍得不清楚,请大家帮忙分析一下:1.为什么没有出现丝状染色啊?2.这种小泡状的染色是怎么回事?

Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝
con.jpg 全部是点点


Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝-1
shRNA1.jpg 出现了泡泡


Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝-2
shRNA1.jpg 大颗粒状


Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝-3
shRNA.jpg 背景里也有类似的大颗粒状染色


Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝-4
shRNA1.jpg 白光下的细胞形态,似乎是散架了
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