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小小鸟fq新虫 (正式写手)
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[求助]
Actin-Tracker Green 染色没有观察到微丝
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关于actin染色的求助。我使用的是Actin-Tracker Green (微丝绿色荧光探针)，Beyotime的。细胞是人肾上皮细胞癌。普通倒置显微镜下观察细胞状态还不错。 下面是我的操作步骤： 铺板 在共聚焦玻片上铺细胞过夜 清洗 预热PBS 3x2min 固定 冰4%多聚甲醛20min 室温 清洗 预热PBS 3x2min 通透 0.1%Triton 10min 室温 清洗 预热PBS 3x2min 染色 30min室温 避光（beyondtime actin tracker ，1:100；Hoechst 1:10000） 清洗 预热PBS 3x2min 避光 封片防淬灭剂 指甲油 避光 4度保存，第二天 共聚焦显微镜观察 片子染出来是整个细胞都是点状的，有一种细胞甚至还是小泡，显微镜下拍得不清楚，请大家帮忙分析一下：1.为什么没有出现丝状染色啊？2.这种小泡状的染色是怎么回事？  con.jpg 全部是点点  shRNA1.jpg 出现了泡泡  shRNA1.jpg 大颗粒状  shRNA.jpg 背景里也有类似的大颗粒状染色  shRNA1.jpg 白光下的细胞形态，似乎是散架了 |
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