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欣晴5832

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应中出现的问题

前段时间pcr用10微升体系可以扩出来,因准备测序,加大体系后反而扩不出来,不知道是哪儿出了问题,请各位帮忙分析一下,谢谢!
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
可能你忘了加某个样品,呵呵!我要加大反应体系的时候一般都是先混合一起加,然后分装成小体系做PCR。
霉菌
2楼2008-12-08 21:42:24
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lipishun

金虫 (小有名气)

如果扩大扩增不出来,建议小量多管
哈哈
3楼2008-12-08 21:47:28
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

我做的体系是50微升,所以就单个加的,加完之后混匀
小量多管对测序会有影响吗?
4楼2008-12-09 18:47:01
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fraser

银虫 (正式写手)


lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫~~
原来也出现过这种现象,50微升的体系产量还没10微升的多,建议小管,然后一起回收
5楼2008-12-10 13:47:40
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

很正常的现象,重新做吧,虽然你认为每次同样的条件做PCR,但每次都是不一样的
帮助虫友,提升自己
6楼2008-12-11 05:14:40
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shenlanf

铜虫 (小有名气)

首先,你要确认你使用的试剂物品都是一致的,如果从小体系变到大体系换了成分,那么出现这样的情况不出奇。
其次,抱着探索的精神,你可以配一个大体系,然后分装成小体系,与大体系同时进行实验,再看看试验结果。
如果小体系有带,而大体系没有,可以适当尝试将变性,T值,复性的时间适当增加。
当然,如果没时间去探索这么多,直接做几个小体系混合就OK了。。。
7楼2008-12-11 14:31:39
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

少量多管,最后将产物混合进行测序,会对测序结果有影响吗?
8楼2008-12-11 20:36:25
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 欣晴5832 at 2008-12-11 20:36:
少量多管,最后将产物混合进行测序,会对测序结果有影响吗?

一个管也是P十个管也是P,反正你小体系条件摸好了,就不要变了,电泳的时候多点样就好了,回收也方便
不孝有三,读博为大!
9楼2009-06-30 15:08:48
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yangxiaofei


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1注意混样
2 注意做对照。排除污染。最好是相同的东西,同时做一个10μ的,做一个20μ的。看下到底是什么原因。
10楼2009-06-30 16:05:08
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