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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR反应中出现的问题
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应中出现的问题

前段时间pcr用10微升体系可以扩出来，因准备测序，加大体系后反而扩不出来，不知道是哪儿出了问题，请各位帮忙分析一下，谢谢！
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1楼 2008-12-08 20:33:37
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gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
可能你忘了加某个样品，呵呵！我要加大反应体系的时候一般都是先混合一起加，然后分装成小体系做PCR。
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霉菌
2楼2008-12-08 21:42:24
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lipishun

金虫 (小有名气)
如果扩大扩增不出来，建议小量多管
哈哈
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3楼2008-12-08 21:47:28
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
我做的体系是50微升，所以就单个加的，加完之后混匀
小量多管对测序会有影响吗？
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4楼2008-12-09 18:47:01
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fraser

银虫 (正式写手)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):鼓励新虫~~
原来也出现过这种现象,50微升的体系产量还没10微升的多,建议小管,然后一起回收
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5楼2008-12-10 13:47:40
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
很正常的现象，重新做吧，虽然你认为每次同样的条件做PCR，但每次都是不一样的
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帮助虫友，提升自己
6楼2008-12-11 05:14:40
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shenlanf

铜虫 (小有名气)
首先，你要确认你使用的试剂物品都是一致的，如果从小体系变到大体系换了成分，那么出现这样的情况不出奇。
其次，抱着探索的精神，你可以配一个大体系，然后分装成小体系，与大体系同时进行实验，再看看试验结果。
如果小体系有带，而大体系没有，可以适当尝试将变性，T值，复性的时间适当增加。
当然，如果没时间去探索这么多，直接做几个小体系混合就OK了。。。
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7楼2008-12-11 14:31:39
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
少量多管，最后将产物混合进行测序，会对测序结果有影响吗？
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8楼2008-12-11 20:36:25
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 欣晴5832 at 2008-12-11 20:36:
少量多管，最后将产物混合进行测序，会对测序结果有影响吗？

一个管也是P十个管也是P，反正你小体系条件摸好了，就不要变了，电泳的时候多点样就好了，回收也方便
赞一下(1人) 回复此楼
不孝有三，读博为大！
9楼2009-06-30 15:08:48
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yangxiaofei

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1注意混样
2 注意做对照。排除污染。最好是相同的东西，同时做一个10μ的，做一个20μ的。看下到底是什么原因。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-06-30 16:05:08
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