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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 三个片段通过酶切连接方法连成线性片段
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jurkat.1640
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9楼: Originally posted by 张小蛋 at 2016-12-16 16:34:14
嗯嗯，我们确实也在用重组酶，但是这个摩尔浓度比用1.:1:1怎么样？
...

11楼2016-12-16 17:06:04
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生物狗-哈

新虫 (初入文坛)
同源重组啊，据说诺唯赞的可以做5个片段以内的，不用考虑酶切位点
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12楼2016-12-16 17:22:33
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张小蛋

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2016-12-16 17:06:04
...

这是可以的意思吗，哈哈哈

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13楼2016-12-16 18:02:28
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张小蛋

新虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-15 23:37:32
设计引物可进行重叠PCR，酶的话最好用高保真的。

pfu效率会不会太低了点

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14楼2016-12-16 18:03:58
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张小蛋

新虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-16 00:06:21
pcr是最快的，如果一定要用酶切连接，就用一个中间载体吧

就是片段太长了，我没太有把握

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15楼2016-12-16 18:04:28
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 生物狗-哈 at 2016-12-16 17:22:33
同源重组啊，据说诺唯赞的可以做5个片段以内的，不用考虑酶切位点

嗯哒嗯哒，我们用的好像不是这个牌子，但也是利用一步克隆方法，不知道是否可以不考虑酶切位点呢

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16楼2016-12-16 18:05:35
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张小蛋

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wuyuanqing at 2016-12-16 00:56:44
全式金的fastpfu或者NEB的Q5
...

谢谢，我尝试一下

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17楼2016-12-16 18:09:54
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