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荨梦者

铁虫 (初入文坛)

[求助] pcr cao zuo xi jie 已有1人参与

新人刚刚接触pcr,在做最简单的用试剂盒把cDNA扩增时,应该如何操作,求一些详细的细节,我在家具内测结果跑胶检测结果,只有marker跑出来了,其他的都不行,求大神们给些建议和注意事项在pcr和跑胶方面,,,,谢谢谢谢谢谢
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跑胶没有什么,你这个主要是pcr的问题。pcr扩增,要注意几点,1 引物确定是没有问题 2 引物的退火温度要合适 3 目的片段的延伸时间
4 合适的酶 5 合适的pcr体系 操作小心,不要漏加东西。一回生二回熟,多总结经验,就好了。
2楼2016-12-14 15:09:19
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荨梦者

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by peitaokong at 2016-12-14 15:09:19
跑胶没有什么,你这个主要是pcr的问题。pcr扩增,要注意几点,1 引物确定是没有问题 2 引物的退火温度要合适 3 目的片段的延伸时间
4 合适的酶 5 合适的pcr体系 操作小心,不要漏加东西。一回生二回熟,多总结经验 ...

谢谢,
我做了好几次pcr了,只有内参可以出理想结果,其他的都是跑的不清晰,不亮。拖带的情况也有,少。引物使用的是试剂盒,
3楼2016-12-14 18:33:20
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