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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助，帮忙分析告知一下，感激不尽。
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yuevis

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助，帮忙分析告知一下，感激不尽。 已有3人参与

本人新手，刚开始做PCR、跑电泳。marker（最右边）跑成这样是怎么回事呢?求助各位！
配的1%的胶，跑胶电压110V，电流110mA，点了5微升的marker。

求助，帮忙分析告知一下，感激不尽。


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1楼 2016-12-13 22:48:41
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shakespace

木虫 (著名写手)

上帝使者
电压高，核酸运动速度快，乱了阵脚

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天赋使命！
3楼2016-12-13 23:06:13
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:31:05
电压是否过大，电泳时不要超过10V/cm。可以低电压，跑时间长点。

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yuevis
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
2楼2016-12-13 22:58:49
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by yuevis at 2016-12-13 23:20:36
网上查，有人说不能超过5V／cm，也有说20V／cm的，而且，那么电流应该怎么设置呢?
...

一般我们都是恒定电压跑，电流没有设定，看一下跑完电泳后缓冲液温度是否太高，最好多换着缓冲液。
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yuevis
知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
6楼2016-12-13 23:25:20
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-13 23:25:20
一般我们都是恒定电压跑，电流没有设定，看一下跑完电泳后缓冲液温度是否太高，最好多换着缓冲液。...

我的电泳槽，电压太高跑的时候就显示恒流，电流太高跑的时候就显示恒压。

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8楼2016-12-13 23:31:09
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by yuevis at 2016-12-13 23:38:54
电泳槽不一样，电压差距会很大吗，我隔壁的实验室，电压、电流都比我的大很多，我的marker在那边跑，胶是我自己配的，用的那边的琼脂糖和TAE，结果条带就很清晰，分得开而且不拖尾。
...

电泳槽越大，电压就要相应加大的。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
11楼2016-12-13 23:42:46
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-14 22:31:23
110v电压是没有什么问题，你这个电流有点儿高，可以把电流降为60mA 以下跑，如果电流过高，会造成电泳液过热，就会导致条带跑的变形。如果电压太高也是同样的道理，但是110v电泳，这个电压是没有问题的。
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yuevis
15楼2016-12-14 19:25:26
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shakespace at 2016-12-13 23:06:13
电压高，核酸运动速度快，乱了阵脚

之前也试了100V，90V，80V，感觉效果都不是太好，会稍微比现在这个好一点。这张图是分别这三个电压跑的marker。
求助，帮忙分析告知一下，感激不尽。-1



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4楼2016-12-13 23:19:04
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yuevis

铜虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-13 22:58:49
电压是否过大，电泳时不要超过10V/cm。可以低电压，跑时间长点。

网上查，有人说不能超过5V／cm，也有说20V／cm的，而且，那么电流应该怎么设置呢?

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5楼2016-12-13 23:20:36
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yuevis

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-13 23:25:20
一般我们都是恒定电压跑，电流没有设定，看一下跑完电泳后缓冲液温度是否太高，最好多换着缓冲液。...

您的意思是电流不设定为零（那么还可以跑吗），还是说您的电流一直是一个定值，就是没管它而已，如果是这样的话，我的电流大概设在哪个范围呢?

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7楼2016-12-13 23:30:03
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sky蒲公英

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【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by yuevis at 2016-12-13 23:30:03
您的意思是电流不设定为零（那么还可以跑吗），还是说您的电流一直是一个定值，就是没管它而已，如果是这样的话，我的电流大概设在哪个范围呢?
...

我们跑的时候，电流都没设，也没怎么注意是多少。只设置了电压和时间就好了。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
9楼2016-12-13 23:32:49
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yuevis

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-13 23:32:49
我们跑的时候，电流都没设，也没怎么注意是多少。只设置了电压和时间就好了。
...

电泳槽不一样，电压差距会很大吗，我隔壁的实验室，电压、电流都比我的大很多，我的marker在那边跑，胶是我自己配的，用的那边的琼脂糖和TAE，结果条带就很清晰，分得开而且不拖尾。

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10楼2016-12-13 23:38:54
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