应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 长片段克隆
41/1返回列表
查看: 2343  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

日九

金虫 (小有名气)

[交流] 长片段克隆 已有3人参与

目前实验室扩增了个长片段，8kb左右，由于样品量较少，就想着做克隆测序。按照虫友提供的思路，用诺唯赞的试剂盒尝试了同源重组的方法，但是pcr在加上同源臂以后，就扩增不出来了。而且我心里也存有疑惑puc19的载体只有2.7kb，如果连接8kb，这么长，能连接的上吗？还有没有什么别的好办法能够克隆长片段呢？
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Judy's Mom

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-12-12 15:27:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增出来了直接ta，和载体大小无关

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-12 18:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Judy's Mom

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
楼主你好，我最近需要扩增长约3kb的片段，楼主能否把你们扩增8kb的体系分享给我？先谢谢了
赞一下 回复此楼
3楼2017-03-19 08:51:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

车前子ing

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目前我扩增过最长的片段是大约4Kb的，虽然有非特异性条带，但经过改善后最终扩出了所需的目的片段，克隆也很成功，可是最近扩一个5Kb的片段，扩出来的非特异性条带比特异性条带还亮，不管怎么改善都一个结果，有时连特异性条带都没有，所以楼主8kb的有没有扩出来，用的什么酶，以及体系，能不能分享一下，跪谢
赞一下 回复此楼
4楼2017-06-12 16:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 日九 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 总分293求调剂 +4 加一一九 2026-03-25 4/200 2026-03-25 12:56 by Dyhoer
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 359求调剂 +3 王了个楠 2026-03-25 3/150 2026-03-25 12:50 by Dyhoer
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 286求调剂 +11 Faune 2026-03-21 11/550 2026-03-25 10:11 by 雾散后相遇lc
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 08工学调剂 +12 用户573181 2026-03-20 17/850 2026-03-24 21:45 by 番茄炖了西红柿
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭