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日九

金虫 (小有名气)

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[交流] 长片段克隆已有3人参与

目前实验室扩增了个长片段，8kb左右，由于样品量较少，就想着做克隆测序。按照虫友提供的思路，用诺唯赞的试剂盒尝试了同源重组的方法，但是pcr在加上同源臂以后，就扩增不出来了。而且我心里也存有疑惑puc19的载体只有2.7kb，如果连接8kb，这么长，能连接的上吗？还有没有什么别的好办法能够克隆长片段呢？

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Judy's Mom

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1楼 2016-12-12 15:27:40

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Neo2000

木虫 (著名写手)

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扩增出来了直接ta，和载体大小无关

发自小木虫Android客户端

2楼2016-12-12 18:00:24

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Judy's Mom

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楼主你好，我最近需要扩增长约3kb的片段，楼主能否把你们扩增8kb的体系分享给我？先谢谢了

3楼2017-03-19 08:51:18

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车前子ing

新虫 (小有名气)

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目前我扩增过最长的片段是大约4Kb的，虽然有非特异性条带，但经过改善后最终扩出了所需的目的片段，克隆也很成功，可是最近扩一个5Kb的片段，扩出来的非特异性条带比特异性条带还亮，不管怎么改善都一个结果，有时连特异性条带都没有，所以楼主8kb的有没有扩出来，用的什么酶，以及体系，能不能分享一下，跪谢

4楼2017-06-12 16:46:42

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