24小时热门版块排行榜    

查看: 2305  |  回复: 3

日九

金虫 (小有名气)

[交流] 长片段克隆 已有3人参与

目前实验室扩增了个长片段,8kb左右,由于样品量较少,就想着做克隆测序。按照虫友提供的思路,用诺唯赞的试剂盒尝试了同源重组的方法,但是pcr在加上同源臂以后,就扩增不出来了。而且我心里也存有疑惑puc19的载体只有2.7kb,如果连接8kb,这么长,能连接的上吗?还有没有什么别的好办法能够克隆长片段呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
扩增出来了直接ta,和载体大小无关

发自小木虫Android客户端
2楼2016-12-12 18:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Judy's Mom

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
楼主你好,我最近需要扩增长约3kb的片段,楼主能否把你们扩增8kb的体系分享给我?先谢谢了
3楼2017-03-19 08:51:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

车前子ing

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目前我扩增过最长的片段是大约4Kb的,虽然有非特异性条带,但经过改善后最终扩出了所需的目的片段,克隆也很成功,可是最近扩一个5Kb的片段,扩出来的非特异性条带比特异性条带还亮,不管怎么改善都一个结果,有时连特异性条带都没有,所以楼主8kb的有没有扩出来,用的什么酶,以及体系,能不能分享一下,跪谢
4楼2017-06-12 16:46:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 日九 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见