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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 扩增10、20个循环各需要引物多少？
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z631535213

木虫 (正式写手)

[求助] 扩增10、20个循环各需要引物多少？ 已有3人参与

楼主需要在体系里加入两对引物，一对扩增前10（20）个循环，另外一对扩增剩下的循环次数（总共40个循环）。引物已稀释成10uM，想请教下扩增10（20个循环）需要多少的引物量

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1楼 2016-12-09 09:18:21
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-12 12:12:06
你做的重叠PCR？ 感觉引物的量可以稍微多点...

不是，之前的是普通PCR

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13楼2017-01-07 16:32:37
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C小杨

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-01-07 21:22:21
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增
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2楼2016-12-09 10:41:56
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增

第一队我设计的理论tm是46，第二对理论tm是55+

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3楼2016-12-09 12:26:06
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z631535213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by C小杨 at 2016-12-09 10:41:56
不想算。建议第二对引物设计的更长，扩增后面的循环的时候，适当提高退火温度；或者分开两次扩增

实验是一次把两对引物都加进去

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4楼2016-12-09 12:26:59
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