24小时热门版块排行榜    

查看: 386  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] 酶切之后连接反应的试验计划大家来帮忙修改修改,谢谢

1 酶切反应:

    100 微升质粒回收产物
    加入 EcoR I  3微升
           Buffer EcoR I
           BamH I 6微升   (酶是 Fermentas 的)

     100 微升PCR回收产物
      加入 EcoR I  3微升
           Buffer EcoR I
           BamH I 6微升   (酶是 Fermentas 的)

温育3小时
   
加入 loading Buffer  琼脂糖电泳 回收

2 连接反应

   1微升 质粒酶切产物
   3微升 PCR酶切产物
   1微升 T4连接酶
   BUFFER
   无菌水 补齐到10微升
16度 过夜

电泳回收
回复此楼

» 猜你喜欢

自信源于一次次成功的积累
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

我们双酶切的时候,都是用的共用的buffer,不知道你买的这个公司的酶是不是就用其中的buffer,你也没有说明你的酶切切开没有
帮助虫友,提升自己
7楼2008-12-22 10:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:42
连接产物为何还要电泳回收?直接转化了吧
这么少是不可能回收到的
2楼2008-12-06 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

威风之狼

金虫 (小有名气)

同楼上连接后直接转化  不要再回收
4楼2008-12-07 12:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:41
16度过夜连接是没有问题的 连完后不用回收 可以直接用于转化
5楼2008-12-07 13:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见