应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酶切之后连接反应的试验计划大家来帮忙修改修改，谢谢
91/1返回列表
查看: 558  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] 酶切之后连接反应的试验计划大家来帮忙修改修改，谢谢

1 酶切反应：

    100 微升质粒回收产物
    加入 EcoR I  3微升
           Buffer EcoR I
           BamH I 6微升   （酶是 Fermentas 的）

     100 微升PCR回收产物
      加入 EcoR I  3微升
           Buffer EcoR I
           BamH I 6微升   （酶是 Fermentas 的）

温育3小时
   
加入 loading Buffer  琼脂糖电泳 回收

2 连接反应

   1微升 质粒酶切产物
   3微升 PCR酶切产物
   1微升 T4连接酶
   BUFFER
   无菌水 补齐到10微升
16度 过夜

电泳回收
回复此楼

» 猜你喜欢
自信源于一次次成功的积累
1楼 2008-12-06 23:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:42
连接产物为何还要电泳回收？直接转化了吧
这么少是不可能回收到的
赞一下(6人) 回复此楼
2楼2008-12-06 23:50:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

威风之狼

金虫 (小有名气)
4度过夜连接
回复此楼
3楼2008-12-07 12:01:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

威风之狼

金虫 (小有名气)
同楼上连接后直接转化  不要再回收
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-07 12:02:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:41
16度过夜连接是没有问题的 连完后不用回收 可以直接用于转化
赞一下(6人) 回复此楼
5楼2008-12-07 13:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)
谢谢大家！
回复此楼
自信源于一次次成功的积累
6楼2008-12-21 23:13:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
我们双酶切的时候，都是用的共用的buffer，不知道你买的这个公司的酶是不是就用其中的buffer，你也没有说明你的酶切切开没有
赞一下 回复此楼
帮助虫友，提升自己
7楼2008-12-22 10:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:41
酶切的buffer你要小心点，我不知知道你的说明书上是怎么写的，不过BamH I酶切效率没有EcoR I 的高，选Buffer要尽量满足BamH I
赞一下(6人) 回复此楼
8楼2008-12-22 17:29:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xychern

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-20 22:41
不需要100ul这么大的酶切体系,控制在20ul足够了

一般37度6小时以上,如果没有星型切割,可以考虑过夜酶切
赞一下(6人) 回复此楼
9楼2008-12-23 21:01:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luckydog52 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:36 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 7/350 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 12/600 2026-11-05 15:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:14 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-05 15:03 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 14:06 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 6/300 2026-11-05 12:16 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 7/350 2026-11-05 11:12 by PYZmcHr5kSaq
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 10:48 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭