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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 自杀质粒连接不上，是连接酶的问题吗？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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su2008su11

木虫 (正式写手)

[求助] 自杀质粒连接不上，是连接酶的问题吗？ 已有1人参与

刚接触基因敲除，用的是pEX18Tc自杀质粒。已构建完成带有上下同源臂、中间插入卡娜抗性基因的片段。现在想把该片段和自杀质粒连接到一起。将二者使用相同的酶切后，用“天根”的T4 DNA连接酶(RT406)。转化到DH5a的感受态细胞中，在含有卡娜和四环素的双抗板上筛选，结果就是看不到菌落。
查阅文献，看到基本都是使用宝生物TAKARA家的T4连接酶。想请教一下，这种情况，是我使用的连接酶造成的吗？
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1楼 2016-12-07 02:07:58
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kiki1991

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

只用卡那抗性试试呢。抗生素的浓度是否是太高了呢。或者改变一下连接体系呢。就是片段，载体和酶的比例。
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2楼2017-02-22 19:33:16
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