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su2008su11木虫 (正式写手)
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自杀质粒连接不上，是连接酶的问题吗？ 已有1人参与
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刚接触基因敲除，用的是pEX18Tc自杀质粒。已构建完成带有上下同源臂、中间插入卡娜抗性基因的片段。现在想把该片段和自杀质粒连接到一起。将二者使用相同的酶切后，用“天根”的T4 DNA连接酶(RT406)。转化到DH5a的感受态细胞中，在含有卡娜和四环素的双抗板上筛选，结果就是看不到菌落。 查阅文献，看到基本都是使用宝生物TAKARA家的T4连接酶。想请教一下，这种情况，是我使用的连接酶造成的吗？ |
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