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豆13

新虫 (小有名气)

[求助] PACYCDUET-1共表达表达量极低,如何解决 已有2人参与

我现在在做三个基因的共表达,一个放在PET22B上,一个放在PACYCDUET-1上,但是两个质粒共同转化筛选得到单克隆后,在PACYCDUET-1上的两个基因几乎没有表达,同实验室也有人做了PACYCDUET-1的转化,表达量也很低,不知道有没有大神做过PACYCDUET-1的转化,怎么操作会让蛋白表达更高一点呢
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WilliamHJ

金虫 (小有名气)

学习中
2楼2016-12-05 23:08:38
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)


3楼2016-12-06 12:51:11
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闲来小译

金虫 (正式写手)

我们实验室也这样,同样的两个基因,在pACYCDuet上共表达和在pET32a上双RBS表达,相差十倍。不知道什么原因。实在不行可以换其他共表达载体的。
4楼2016-12-08 09:54:29
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PCR小王子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主你好
我现在也想做多个基因共表达,查找文献得到的体系是pACYCDuet-1,petDuet-1.
你的问题会不会是两个载体不兼容引起的?
我这里有petDuet-1,可以跟你换pACYCDuet-1么?
5楼2016-12-08 10:20:33
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黑色青春

铜虫 (小有名气)

请问楼主现在是如何解决这个问题的
6楼2017-03-21 16:08:52
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In_vain

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


豆13: 金币+1 2017-10-09 16:29:43
pACYCDuet是单拷贝型的质粒,表达数量会很低,建议你用pRSTDuet或者pCDFDuet这两个质粒,都可以跟pET28a兼容,并且表达量高
7楼2017-08-17 10:01:55
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莫落

木虫 (正式写手)

8楼2017-08-17 10:53:30
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