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fengjunchen铜虫 (小有名气)
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[求助]
求助可用于大肠杆菌的低强度的表达质粒
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实验涉及要研究大肠杆菌中的信号通路的开启和关闭，需要做基因的敲除和过表达。敲除已经确定使用RED重组系统的pKD46质粒，过表达方面不知道该选择哪种质粒？ 需要的过表达质粒不能是pET系列那种表达高到都抑制细胞正常翻译的程度，只是适量的高表达即可，然后看下游基因哪些被上调哪些被下调。 诱导方面，一个质粒需要可诱导，比如阿拉伯糖诱导之类的，启动子是上段提到的比较强但不是强到影响细胞正常生长的那种启动子；另一个需要组成型表达，但是需要更换rrnBP1的调控序列和启动子，后面我自己接GFP作为报告基因用。 文献中找到的质粒，真从国外买，那过海关的速度实在不能忍……还是希望能从国内找到能用的质粒。 求懂得前辈们帮忙告知个能满足上述哪俩需求的质粒。 |
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