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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于蛋白表达和Q柱纯化蛋白的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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lemonvivi

新虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白表达和Q柱纯化蛋白的问题 已有1人参与

最近做一个脂肪酶野生型和突变型蛋白的纯化，载体采用组成型pgapzaa,表达菌柱x33,蛋白等点电预测5.65，采用先20mMTris-HCL平衡柱子,然后上样，接着再用20mMTris-HCL平衡柱子，接着用200mmolNaCL,20mMTris-HCL洗脱目的蛋白，最后用1MNaCL,20mMTris-HCL冲洗柱子.
整个操作过程出现一下现象:
删了3个氨基酸的突变体导致了另一个杂蛋白大量表达，这是怎么回事；
突变体纯化跟野生型一样的条件，但是蛋白挂不上去；
请大神帮我解决一下问题

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1楼 2016-11-29 20:50:43
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popo0625

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
表达上清最好先浓缩，然后透析换液，至少1:20
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认真活每一天
2楼2016-11-30 15:33:36
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