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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 目的基因太大受体细胞无法表达怎么办？
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)

[交流] 目的基因太大受体细胞无法表达怎么办？ 已有3人参与

我的目的基因大小是1200bp左右，扩增，胶回收，酶切，连接质粒，层层验证都没问题。就是导入大肠杆菌中无法表达（没有抗性），请问是目的基因过大导不进去吗？是没有成功的可能性吗？我应该继续做吗？请求高人指点，感激不尽！

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1楼 2016-11-29 15:02:02
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零点忧郁

铜虫 (小有名气)
★
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1200bp不算大， 应该还是转化的问题， 可以试试电转化
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2楼2016-11-29 19:06:10
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dissector

金虫 (小有名气)
★
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2500bp 在pwpi 上能表达出来，你用的是什么质粒，连接够酶切鉴定或者测序有没有问题

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3楼2016-11-29 20:45:20
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dissector at 2016-11-29 20:45:20
2500bp 在pwpi 上能表达出来，你用的是什么质粒，连接够酶切鉴定或者测序有没有问题

我用的是BL21 大肠杆菌。连接验证没有问题。

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4楼2016-11-29 23:06:29
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qs8lhy86 at 2016-11-29 23:06:29
我用的是BL21 大肠杆菌。连接验证没有问题。
...

质粒是PET-28提的质粒。验证也没问题。。我觉得是BL21的问题？

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5楼2016-11-29 23:07:19
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qs8lhy86

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dissector at 2016-11-29 20:45:20
2500bp 在pwpi 上能表达出来，你用的是什么质粒，连接够酶切鉴定或者测序有没有问题

质粒是PET-28提的质粒。验证也没问题。。我觉得是BL21的问题？

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6楼2016-11-29 23:11:05
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dissector

金虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by qs8lhy86 at 2016-11-29 23:11:05
质粒是PET-28提的质粒。验证也没问题。。我觉得是BL21的问题？
...

可以试一下换质粒，我这个原来师兄没表达出来，我换了一个质粒做出来，有可能就是原来的质粒坏了

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7楼2016-11-29 23:26:34
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★
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1.2 kb的基因不算大，如果质粒大于10 bk倒是很难转化到细菌里
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8楼2016-12-01 16:17:59
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