应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样保证酶切位点不丢失？
51/1返回列表
查看: 645  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

gxsulong

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 怎样保证酶切位点不丢失？

我最近在做易错PCR，做完后产物通过胶回收，用BamH 1和Bgl2进行双酶切。但与载体连的时候总是连不上，我怀疑我在做易错PCR的过程中酶切位点丢失导致PCR产物不能酶切。现在查了很久都查不出原因，谁做过这方面的实验，怎么避免在PCR过程中酶切位点不丢失？（我的应为设有保护碱基）谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
霉菌
1楼 2008-12-04 19:36:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！ 2-22 08:58
1. 先将PCR产物连接到T载体，再测序；
2. 如酶切位点突变，再用保真度高的聚合酶以含PCR产物的T载体为模板，在新的PCR产物中恢复酶切位点。
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-12-04 19:56:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gxsulong

至尊木虫 (著名写手)
好的，谢谢。我明天试试看
赞一下 回复此楼
霉菌
3楼2008-12-04 20:05:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
补充： 将PCR产物连接到T载体后，先双酶切试试，如能切下回收PCR产物，先不急于测序。不过BamH1和Bgl2是同尾酶，载体自身连接概率很大。PCR产物插入方向可以是双向的。
Good luck！
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-04 21:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoqishu

铜虫 (初入文坛)
★ ★
sxdxrhyy(金币+2,VIP+0):谢谢参与！ 2-22 08:58
就是啊，BamH1和Bgl2是同尾酶，载体自身连接概率很大。PCR产物插入方向也可以是双向的。如果你的载体是用其中一个酶切的话，要进行去磷酸化。连接要做一个空载体对照，转化涂板后，看对照组的菌长的要是多的话，那么自连的就很多。
如果可以的话，最好不要用同尾酶切。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2009-02-22 01:01:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gxsulong 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+5 vida_a 2026-03-01 14/700 2026-03-02 17:45 by barlinike
[考研] 环境调剂 +3 chenhanheng 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:37 by houyaoxu
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +3 lr1212.. 2026-03-02 3/150 2026-03-02 17:36 by yeahyou
[考研] 085600求调剂 +3 LRZZZZZZ 2026-03-02 3/150 2026-03-02 16:58 by zeng1010
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分，求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕，总分295分 +5 yl1 2026-03-02 5/250 2026-03-02 15:24 by sucesssucess
[考研] 0856化工专硕求调剂 +15 董boxing 2026-03-01 15/750 2026-03-02 15:06 by 晃晃不许晃
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +4 Qwertyuop 2026-03-01 4/200 2026-03-02 14:27 by 升格阿达
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 化工270求调剂 +8 什么名字qwq 2026-03-02 8/400 2026-03-02 13:03 by houyaoxu
[考研] 一志愿山东大学材料与化工325求调剂 +3 半截的诗0927 2026-03-02 3/150 2026-03-02 12:58 by houyaoxu
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 264求调剂 +4 巴拉巴拉根556 2026-02-28 4/200 2026-03-02 10:48 by yuchj
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博！
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭