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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒酶切的体积计算问题，告急！！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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MIDNA

铁虫 (小有名气)

[求助] 质粒酶切的体积计算问题，告急！！！！ 已有5人参与

质粒双酶切时，用到两个酶，那我该怎样计算所需的质粒的体积？biffer该加多少？我用的是THERMO的，有哪位师兄师姐用过？求指导！！！
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默默搜寻
1楼 2016-11-28 14:49:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Ailee桑卡娜

新虫 (小有名气)
查下说明找两个酶的共同Buffer

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14楼2016-12-02 22:21:09
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普通回帖

010308Jing

木虫 (正式写手)
质粒的体积大概就可以，buffer不是根据你的体系加么？

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2楼2016-11-28 17:24:36
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不吃M的鱼

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-28 21:55:25
质粒一般切个1ug。快切酶的话buffer是一种，20ul体系加2就行。如果不是快切酶，Thermo分好几种buffer,得根据你用的酶去官网查

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3楼2016-11-28 17:28:13
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是1u酶对应1000ng的质粒吧

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···
4楼2016-11-28 18:26:36
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-28 18:26:36
一般都是1u酶对应1000ng的质粒吧

好的，谢谢！
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默默搜寻
5楼2016-11-28 18:35:49
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不吃M的鱼 at 2016-11-28 17:28:13
质粒一般切个1ug。快切酶的话buffer是一种，20ul体系加2就行。如果不是快切酶，Thermo分好几种buffer,得根据你用的酶去官网查

谢谢你！
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6楼2016-11-28 18:37:40
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liling0601

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-11-28 21:55:42
酶的说明说上都有的，做实验一定要仔细看说明书，质粒体积根据质粒浓度算，首先定一个酶切总体系体积，再确定自己需要切多少的质粒，这根据用途决定，如果只是构载体，切个5微克，100或者200微升的总体积

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7楼2016-11-28 18:44:34
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liling0601 at 2016-11-28 18:44:34
酶的说明说上都有的，做实验一定要仔细看说明书，质粒体积根据质粒浓度算，首先定一个酶切总体系体积，再确定自己需要切多少的质粒，这根据用途决定，如果只是构载体，切个5微克，100或者200微升的总体积
...

那我双酶切，buffer的用量只加一个酶的，还是两个都要加？
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默默搜寻
8楼2016-11-28 18:58:21
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XuXuV_V

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by MIDNA at 2016-11-28 18:58:21
那我双酶切，buffer的用量只加一个酶的，还是两个都要加？...

用公用buffer就好了呀，看你用的什么酶

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9楼2016-11-28 20:49:07
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MIDNA

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by XuXuV_V at 2016-11-28 20:49:07
用公用buffer就好了呀，看你用的什么酶
...

我用的快切酶，THERMO的
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10楼2016-11-29 08:19:50
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