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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达引物设计
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-11-25 21:04:27
如果活性中心在C段有可能会有影响
...

好的  谢谢你

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11楼2016-11-25 21:57:44
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从突变位点开始PCR全质粒，就可以了。引物里设计突变。pcr完后用DpnI酶消化处理掉模板质粒，直接转化，挑单克隆测序。
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Comeon！
12楼2016-11-25 22:29:29
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 我爱chi辣椒 at 2016-11-25 20:37:21
要看你用什么载体，比如你用pET28a，前后都有标签。一般留一个就行了。如果你想要保留后面的标签，就一定要把终止密码子去掉，或者突变了。

我还想问几个问题    S-Tag标签编码的是什么？S-Tag，His-Tag对制备抗体有没有影响？在pET29a载体的NdeI旁边的ATG碱基后面插入目的基因，编码后的蛋白是否会被降解掉？

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13楼2016-12-02 14:34:28
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王木木2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-11-25 20:32:42
终止密码子去掉比较好！！！

我还想问几个问题    S-Tag标签编码的是什么？S-Tag，His-Tag对制备抗体有没有影响？在pET29a载体的NdeI旁边的ATG碱基后面插入目的基因，编码后的蛋白是否会被降解掉？

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14楼2016-12-02 14:35:24
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是僧不信佛

新虫 (初入文坛)
终止密码子去掉比较方便

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15楼2016-12-02 15:49:42
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
14楼: Originally posted by 王木木2016 at 2016-12-02 14:35:24
我还想问几个问题    S-Tag标签编码的是什么？S-Tag，His-Tag对制备抗体有没有影响？在pET29a载体的NdeI旁边的ATG碱基后面插入目的基因，编码后的蛋白是否会被降解掉？
...

标签一般做抗体表达出来分离纯化后最好去掉，是否影响不同蛋白需要自己尝试。

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16楼2016-12-03 06:21:18
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
S tag是一种纯化标签，具体没有做过我也不清楚。大的标签需要去掉，小的就用不着了。你可以直接打电话给生物公司，他们有技术支持。

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A right way maybe not a good way！
17楼2016-12-07 11:46:38
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