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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 测序质粒浓度低怎么解决
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wy604987664

新虫 (小有名气)

[求助] 测序质粒浓度低怎么解决 已有2人参与

1.载体拷贝数低，每回送测，结果返回不是质粒浓度低就是菌液培养失败。怎么办？！！
2.我自己提质粒送测，提质粒后测浓度在90ng/ul，送15ul样，测序还是质粒浓度低，到底什么情况呢？？
3.做连接转化时涂板，板上每次都长，并且板上长的也正常，可就是测不出来！！
谁有解决方法

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1楼 2016-11-21 14:12:49
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
多提点

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2楼2016-11-21 20:08:12
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漫步青苔

新虫 (初入文坛)
换一家测序公司试一试，90ng/ul测序还可以啊

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3楼2016-11-21 20:13:13
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rhapsody007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、从提取方面解决：可以换个方法或者试剂盒来提质粒，可以试试磁珠，灵敏度或许高一些。最后洗脱的时候，少加一些洗脱液，浓度会高一些
2、从测序方面解决：打电话到测试公司，跟技术说明一下情况，对方觉得能测再送样
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吉恩特磁珠
4楼2016-11-22 11:00:03
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vanessa_1st

新虫 (初入文坛)
可能是引物不好用吧~这个浓度应该没问题了，总数200ng就可以测序了。

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5楼2017-07-23 18:06:50
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稻草3

新虫 (初入文坛)
请问解决了吗，遇到同样的问题，菌液pcr测序正确，送载体的去测就浓度偏低，测不出来？
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6楼2018-05-16 15:26:17
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

也遇到过这样的情况。可以考虑如下：
在你确认自己提取的质粒浓度、酶切跑胶等等都没有问题，是阳性克隆后，将情况向测序公司予以说明，一方面可能是序列有些特殊，请他们对测序条件进行优化，另一方面，真的，换家公司，有时候他们不负责……
祝好！
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7楼2018-05-16 17:22:30
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