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wy604987664

新虫 (小有名气)

[求助] 测序质粒浓度低怎么解决已有2人参与

1.载体拷贝数低,每回送测,结果返回不是质粒浓度低就是菌液培养失败。怎么办?!!
2.我自己提质粒送测,提质粒后测浓度在90ng/ul,送15ul样,测序还是质粒浓度低,到底什么情况呢??
3.做连接转化时涂板,板上每次都长,并且板上长的也正常,可就是测不出来!!
谁有解决方法

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迷路人啊

新虫 (小有名气)

2楼2016-11-21 20:08:12
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漫步青苔

新虫 (初入文坛)

换一家测序公司试一试,90ng/ul测序还可以啊

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3楼2016-11-21 20:13:13
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rhapsody007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、从提取方面解决:可以换个方法或者试剂盒来提质粒,可以试试磁珠,灵敏度或许高一些。最后洗脱的时候,少加一些洗脱液,浓度会高一些
2、从测序方面解决:打电话到测试公司,跟技术说明一下情况,对方觉得能测再送样
吉恩特磁珠
4楼2016-11-22 11:00:03
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vanessa_1st

新虫 (初入文坛)

可能是引物不好用吧~这个浓度应该没问题了,总数200ng就可以测序了。

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5楼2017-07-23 18:06:50
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稻草3

新虫 (初入文坛)

请问解决了吗,遇到同样的问题,菌液pcr测序正确,送载体的去测就浓度偏低,测不出来?
6楼2018-05-16 15:26:17
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maoniuniu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

也遇到过这样的情况。可以考虑如下:
在你确认自己提取的质粒浓度、酶切跑胶等等都没有问题,是阳性克隆后,将情况向测序公司予以说明,一方面可能是序列有些特殊,请他们对测序条件进行优化,另一方面,真的,换家公司,有时候他们不负责……
祝好!
7楼2018-05-16 17:22:30
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