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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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_Unicorn

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于删除编码序列中ER 的HDEL作用 已有1人参与

最近读了一篇文章，文中在烟草叶片中进行亚细胞共定位时，作者把内质网的hdel删除了，接着做了内质网的荧光蛋白定位 ， 我很想知道删除hdel这一步是为什么， 是不是hdel会对含有信号肽的定位产生影响？
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1楼 2016-11-20 15:10:43
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starseacow

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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_Unicorn: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-11-20 20:59:01
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-23 20:51:13
回答这个问题，你需要了解的是为什么在荧光蛋白上连接HDEL。
首先，荧光蛋白如GFP本身，在细胞中表达会显示弥散在细胞质内，没有特定表达位置。为了让荧光蛋白位于特定亚细胞位置，借鉴动物细胞研究的方法，首先在GFP上连接来自马铃薯块茎储存蛋白上的一个23个氨基酸长肽段 patatin使得GFP会被导向ER。接下来为了让 patatin-GFP能够一直留在ER内，又将KDEL及长春HSP90同系蛋白C端的七个氨基酸连在GFP的C端，这样形成的patatin-GFP-KDEL将一直在ER中。HDEL起类似作用。
一般来说删去HDEL，主要是在traffic研究中。patatin-GFP会从ER通过指向PM的转运途径运出胞外，这样的荧光信号可以用于标记一些和向细胞外转运的亚细胞器与途径。
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2楼2016-11-20 20:37:38
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_Unicorn

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2016-11-20 20:37:38
回答这个问题，你需要了解的是为什么在荧光蛋白上连接HDEL。
首先，荧光蛋白如GFP本身，在细胞中表达会显示弥散在细胞质内，没有特定表达位置。为了让荧光蛋白位于特定亚细胞位置，借鉴动物细胞研究的方法，首先在 ...

长春hsp90是指什么 hsp90是指热休克蛋白 它连在gfpc端就能固定住gfp在想要的亚细胞位点吗？
PM的转运途径又是什么呢 ，
作者在文中还做了高尔基体的亚细胞定位，是不是也用类似的信号序列去诱导定位？
刚开始接触这些东西 好多都不是很懂 想搞明白
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3楼2016-11-20 21:13:44
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starseacow

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引用回帖:
3楼: Originally posted by _Unicorn at 2016-11-20 21:13:44
长春hsp90是指什么 hsp90是指热休克蛋白 它连在gfpc端就能固定住gfp在想要的亚细胞位点吗？
PM的转运途径又是什么呢 ，
作者在文中还做了高尔基体的亚细胞定位，是不是也用类似的信号序列去诱导定位？
刚开始接 ...

长春花细胞中的HSP90，换了新笔记本，键盘用的非常不习惯。
HSP90的那个序列可以视作为一种信号肽。
PM转运途径即由细胞生物合成与分泌途径，主要从ER去往细胞膜。另外的途径就是细胞内转运和液泡转运。
高尔基体的亚细胞定位可以用一些特定的蛋白用来标记，比如拟南芥中的 Glycosyltransferase 以及1,2 α-mannosidase ，连上荧光蛋白,35S启动子控制下就可以定位表达。
不过我认为一般把目的基因连荧光蛋白再和标记共定位比较这种方法不是很靠谱，王道还是有条件的情况下做亚细胞组份的western。
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4楼2016-11-21 03:12:36
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_Unicorn

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2016-11-21 03:12:36
长春花细胞中的HSP90，换了新笔记本，键盘用的非常不习惯。
HSP90的那个序列可以视作为一种信号肽。
PM转运途径即由细胞生物合成与分泌途径，主要从ER去往细胞膜。另外的途径就是细胞内转运和液泡转运。
高尔基 ...

非常感谢您的指导
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5楼2016-11-21 17:00:20
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