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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。
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condy

新虫 (小有名气)

[求助] 用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。 已有1人参与

考虑到标记DNA后做EMSA的方法很麻烦，就先用没标记的DNA做EMSA，跑完非变性胶后直接EB染色。结果见图 DNA marker右边一次是100ng的自由DNA，100ngDNA+15uM蛋白，100ngDNA+30uM蛋白，100ngDNA+60uM蛋白，100ngDNA+80uM蛋白. 结果很像是发生了阻滞，但为什么阻滞的蛋白条带是斜的？而且发生阻滞后一点自由DNA也看不到？ 蛋白质能被EB染色吗？
   望高手解答，不胜感激！

用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。
IMG_20161116_214951_HDR.jpg
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1楼 2016-11-18 04:55:40
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domopal

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先，蛋白质不能被EB染色（见EB染色原理）。其次，阻滞后一点自由DNA也看不到可能是你的蛋白质过量，把探针结合完全了。你可以减低蛋白浓度，多做几个梯度。一般蛋白质2uM就能明显看到延迟带。
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贞
2楼2017-11-27 17:06:32
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13504927475

新虫 (初入文坛)
你好，我也在做这样的实验，用没标记的DNA做EMSA，不知道可不可告诉一下你具体的过程呢，
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3楼2019-07-08 21:11:17
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