应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。
31/1返回列表
查看: 3302  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

condy

新虫 (小有名气)

[求助] 用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。 已有1人参与

考虑到标记DNA后做EMSA的方法很麻烦，就先用没标记的DNA做EMSA，跑完非变性胶后直接EB染色。结果见图 DNA marker右边一次是100ng的自由DNA，100ngDNA+15uM蛋白，100ngDNA+30uM蛋白，100ngDNA+60uM蛋白，100ngDNA+80uM蛋白. 结果很像是发生了阻滞，但为什么阻滞的蛋白条带是斜的？而且发生阻滞后一点自由DNA也看不到？ 蛋白质能被EB染色吗？
   望高手解答，不胜感激！

用EB染PAGE胶检测EMSA是否成功，遇到困惑。
IMG_20161116_214951_HDR.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-11-18 04:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

domopal

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先，蛋白质不能被EB染色（见EB染色原理）。其次，阻滞后一点自由DNA也看不到可能是你的蛋白质过量，把探针结合完全了。你可以减低蛋白浓度，多做几个梯度。一般蛋白质2uM就能明显看到延迟带。
赞一下 回复此楼
贞
2楼2017-11-27 17:06:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

13504927475

新虫 (初入文坛)
你好，我也在做这样的实验，用没标记的DNA做EMSA，不知道可不可告诉一下你具体的过程呢，
赞一下 回复此楼
3楼2019-07-08 21:11:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 condy 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化工求调剂！ +37 RichLi_ 2026-04-06 37/1850 2026-04-13 10:25 by sophia_93
[考研] 材料复试求调剂 +21 xhhdjdjsjks 2026-04-09 21/1050 2026-04-13 08:43 by lhj2009
[考研] 310求调剂 +13 666真好 2026-04-11 14/700 2026-04-12 16:48 by 1005715100
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 材料与化工300求调剂 +39 肖开文 2026-04-09 43/2150 2026-04-12 01:30 by 秋豆菜芽
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +16 叶zilin 2026-04-10 16/800 2026-04-11 11:04 by may_新宇
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 调剂 +19 2261744733 2026-04-08 19/950 2026-04-09 19:11 by vgtyfty
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 338求调剂 +8 wxygxsaaaaa 2026-04-06 8/400 2026-04-08 06:58 by 无际的草原
[考研] 生物医药调剂｜SCI中科院三区一作+多项科研成果 +8 likangxing 2026-04-07 11/550 2026-04-08 00:02 by lys0704
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭