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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 核酸变性聚丙烯凝胶电泳的问题
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shangna

新虫 (初入文坛)

[求助] 核酸变性聚丙烯凝胶电泳的问题 已有3人参与

撬玻璃板的时候，涂了剥离硅烷的耳朵板上也粘胶，两个板子上都粘，有的根本没法染色。
我每次都先用 95%的酒精把板子擦两遍，之后涂剥离和亲和的时候怕粘板子，所以涂的特别多，两个板子分别得4~5ml的样子。
有没有可能是药的问题，因为之前没出现过这种情况，还是我亲和和剥离胶涂的太多了，反而影响结果
亲和比例：3ml酒精+100ul醋酸+100ul blind
剥离比例：3ml氯仿+100ulrepel

核酸变性聚丙烯凝胶电泳的问题


核酸变性聚丙烯凝胶电泳的问题-1


核酸变性聚丙烯凝胶电泳的问题-2


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1楼 2016-11-16 20:17:18
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wsywxs

木虫 (正式写手)
★ ★
kuaile5420: 金币+2, 欢迎发帖交流 2016-11-23 20:25:02
建议换新的亲和硅烷试试，上学那会也遇到过这样的情况，玻璃擦了又擦，原因一个一个排除，最后是亲和的问题。当然，天气原因也是一个，涂完剥离和亲和之后要尽可能晾干。阴雨天，晾干的特别慢，也容易出现这种情况。希望对你实验有帮助，祝好！

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12楼2016-11-18 02:37:32
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小虫s

木虫 (小有名气)
我以前都是把玻璃板子放烘箱40℃十分钟，拿出来再涂硅烷，效果不错，你可以试试

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14楼2016-11-20 00:04:11
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旷野の风

金虫 (小有名气)
玻璃板没有洗干净

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4楼2016-11-16 23:44:35
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shangna

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zl_real at 2016-11-17 08:28:35
用硬刷子，玻璃硅烷和反硅化剂用sigma的，我当初变性剂用的尿素

我后来借的别的配好的剥离和亲和，一点也不粘板子，但是我师妹用我们自己的药做了一次也不粘板子，我现在就凌乱了，是药的事还是我得事〒_〒

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8楼2016-11-17 10:16:45
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hongbaojiang

新虫 (正式写手)
洗净之后酒精擦一遍，然后亲和擦两遍，剥离擦一遍就好了

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11楼2016-11-17 23:00:36
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lichengpu

新虫 (著名写手)
粘板子和漂胶是亲和胶涂抹过多或者不匀造成的。建议你重新配一下亲和剂和剥离剂再试试

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

shangna
13楼2016-11-19 06:49:06
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wzt1417

新虫 (小有名气)
两块玻璃板涂完后，晾干久一些，可以用小风扇吹，这跟没洗干净关系不大

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15楼2016-11-20 03:19:51
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
shangna: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-11-22 18:19:10
shangna: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-11-22 18:19:11
我用的是买的剥离硅烷和亲和硅烷，用的时候直接滴到洗好晾干的玻璃板上，迅速用擦镜纸涂匀。注意的是两块玻璃每次做胶涂的必须是一致的，因为硅烷很难洗下去，如果你这次是亲和，下次是剥离，交叉的话就不行了。

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17楼2016-11-20 22:21:57
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shangna

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 骆明亮 at 2016-11-21 09:26:24
不过，我们当时做时没涂那么多。  对啦配胶那些液体有木有过滤下。

pa有过滤，找到原因了，是因为亲和涂的太多了，只涂了一遍，不粘板子啦

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26楼2016-11-22 18:21:21
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shangna

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by lichengpu at 2016-11-19 06:49:06
粘板子和漂胶是亲和胶涂抹过多或者不匀造成的。建议你重新配一下亲和剂和剥离剂再试试

谢谢你，又试了少涂亲和，就是亲和涂太多的原因

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27楼2016-11-22 18:23:28
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lirujian1994

新虫 (初入文坛)
跑的好漂亮

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2楼2016-11-16 20:47:00
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shangna

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lirujian1994 at 2016-11-16 20:47:00
跑的好漂亮

能不能给点建设性意见

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3楼2016-11-16 20:48:10
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lirujian1994

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shangna at 2016-11-16 20:48:10
能不能给点建设性意见
...

我跑过非变性的 没跑过变性的

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5楼2016-11-17 00:49:07
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shangna

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 旷野の风 at 2016-11-16 23:44:35
玻璃板没有洗干净

刷了好几遍呢，而且用酒精涂了好几遍

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6楼2016-11-17 08:22:26
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zl_real

至尊木虫 (著名写手)
用硬刷子，玻璃硅烷和反硅化剂用sigma的，我当初变性剂用的尿素

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开心就好
7楼2016-11-17 08:28:35
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shangna

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lirujian1994 at 2016-11-17 00:49:07
我跑过非变性的 没跑过变性的
...

好吧，还是谢谢啦

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9楼2016-11-17 10:17:11
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liugs

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 屏蔽内容, 禁止发布商业性回帖 2016-11-20 22:53:24
本帖内容被屏蔽
10楼2016-11-17 15:06:01
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