24小时热门版块排行榜    

查看: 776  |  回复: 8
当前主题已经存档。

dcb005

金虫 (著名写手)

[交流] 酶切不能获得目的基因条带

转化后,长出的菌落做菌落PCR,可以扩出和目的基因一样大小的条带,挑取可以扩出目的带的菌落(在做菌落PCR时已经做相应的划线培养),提取质粒后,双酶切也没有切出750bp大小的条带。我的载体是PBI 121
       请教,这是什么原因?如何解决?
       谢谢您的帮助!

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-2 at 12:10 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

★穷则独善其身,达则兼济天下★
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qwky2010

金虫 (著名写手)

目的片段中有可能是含有酶切位点,或许就是双酶切体系有问题
天道酬勤
2楼2008-12-02 21:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dcb005

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by qwky2010 at 2008-12-2 21:32:
目的片段中有可能是含有酶切位点,或许就是双酶切体系有问题

设计引物时已经考虑到了酶切位点,序列中不可能含酶切位点,体系是切T载体的体系,T载体切开了,应该没什么问题
但双酶切就是切不开
★穷则独善其身,达则兼济天下★
3楼2008-12-02 21:43:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

有没有加保护碱基
帮助虫友,提升自己
4楼2008-12-05 04:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhuimeiye

木虫 (著名写手)

考虑一下酶切体系,建议过夜切,如果只是为了鉴定,不行就测序吧
5楼2008-12-05 08:17:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)

试试分步酶切,或者调整酶切体系,实在切不出来,直接送去测序吧
我是笨笨鱼~~~
6楼2008-12-05 09:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

也有可能是上样量的问题,看不清楚
7楼2008-12-05 09:20:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cynjau

金虫 (小有名气)

酶切5-6小时后,用2%的胶电泳看看!
还有就是你用PCR鉴定是不准确的,我也遇到这种情况的。
因为引物可能不特异的,你也许会奇怪为什么非特异性片段为什么和目的片段大小一样?这我也不知道为什么!
你把空载体也PCR一下,很可能也能获得那个片段!
所以我现在都不做PCR检测,直接酶切检测的,由于你的片段相对于载体较小,用浓度较大的胶,点上10微升的酶切产物检测!祝好!
8楼2008-12-07 16:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figo.339

木虫 (著名写手)

做单双酶切,同时双酶切要分布酶切,同时要考虑是不是酶的问题。
9楼2008-12-07 21:30:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dcb005 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +8 Auroracx 2026-03-22 8/400 2026-03-26 19:55 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +13 Faune 2026-03-21 13/650 2026-03-26 19:52 by peike
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 271求调剂 +6 生如夏花… 2026-03-22 6/300 2026-03-26 16:48 by 张凯十八号
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +4 李轶男003 2026-03-20 4/200 2026-03-26 16:05 by 哇啦啦啦xtj
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见