| 查看: 3488 | 回复: 24 | |||
[交流]
质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳检测 已有20人参与
|
|||
|
一、碱变性法提取质粒DNA 质粒(Plasmid)是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒 DNA探针技术及检测质粒的pcr技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。 分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增；细菌菌体的裂解;质粒DNA的提取与纯化。 本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA 。 【原理】 细菌培养物加入SDS和NaOH碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。 【材料】 1、菌株E.coliJM109（pUC19），E.coliRRI（pBR322） 2、试剂溶液Ⅰ(50mM葡萄糖,25mMTris.HclPH8.0,10mMEDTA) 溶液II(0.2NNaOH，1%SDS)用前新配制 溶液III(5mMKAc溶液，PH4.8) TE缓冲液(10mMTris.Hcl,1mMEDTA，PH8.0) LB液体培养基(胰蛋白胨10g，酵母粉5g,Nacl10g，加蒸馏水溶解，用NaOH调PH至7.5，加水至1000ml，15磅高压灭菌15分钟。) 【方法】 本部分内容设定了隐藏,需要回复后才能看到[/quote] 二、琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳技术（Agarosegelelectroghoresis）是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。凝胶分辨率决定于使用材料的浓度，并由此决定凝胶的孔径。琼脂糖凝胶可分辩0.1~6.0kb的双链DNA片段。琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。它首先利用琼脂糖的分子筛效应，此外，在弱碱性条件下，DNA分子带负电荷，从负极向正极移动。根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同，它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。借助溴化乙锭（EB）能与双链DNA结合的作用，利用EB染色，并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。 【材料】 1、琼脂糖、10×TAE电泳缓冲液（40mMTris,20mMNaAc,1mMEDTA，PH8.0） 2、载体缓冲液（0.25%溴酚蓝，30%甘油）、溴化乙锭水溶液（10mg/ml） 3、凝胶槽、电泳仪 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
2026博士还有哪些学校有名额
已经有4人回复
-
上海大学实验技术岗位非升即走
已经有5人回复
-
窗边初夏的小雨
已经有11人回复
-
西南大学考核制博士
已经有7人回复
-
裁员滚滚，退居二线
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 现代分子生物学实验技术
已经有17人回复
- 分子生物学常用实验
已经有128人回复
- 质粒DNA的分离、纯化和鉴定
已经有32人回复
- 极纠结！求高手高手高高手！！实时荧光PCR扩增正常，为何跑胶始终弥散？
已经有4人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 现代分子生物学实验技术
已经有324人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 【资料】生物实验必备（很全的）
已经有725人回复
- 【分享】DNA重组实验中的部分技术
已经有159人回复
natureandsci
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1817.1
- 散金: 308
- 帖子: 100
- 在线: 235.3小时
- 虫号: 1042332
- 注册: 2010-06-16
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
5楼2016-11-18 14:20:29
| 额 |
2楼2016-11-13 14:34:12
3楼2016-11-13 15:40:48
4楼2016-11-17 19:06:43
冷武2016
银虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 505.2
- 帖子: 88
- 在线: 40.6小时
- 虫号: 5117343
- 注册: 2016-10-13
- 性别: GG
- 专业: 养殖与渔业工程学
6楼2016-11-18 14:52:59
one day
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1834.4
- 散金: 82
- 红花: 1
- 帖子: 198
- 在线: 50.1小时
- 虫号: 4282191
- 注册: 2015-12-11
- 性别: MM
- 专业: 药物化学
7楼2016-11-28 14:31:50
one day
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1834.4
- 散金: 82
- 红花: 1
- 帖子: 198
- 在线: 50.1小时
- 虫号: 4282191
- 注册: 2015-12-11
- 性别: MM
- 专业: 药物化学
8楼2016-11-28 14:32:10
|
谢谢分享 发自小木虫IOS客户端 |
9楼2016-12-02 18:39:14
10楼2016-12-08 15:37:31
精华III:
20