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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 双酶切时，两个酶切位点离太近大约14bp，会不会不能切开？
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木兰8078

禁虫 (正式写手)
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1楼 2016-11-07 15:04:39
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 木兰8078 at 2016-11-07 18:28:10
谢谢！那现在我转化得到的都是原来的质粒，没有目标片段的，怎么解释？...

没连上很正常啊，这有好多因素，目的片段大小，浓度，感受态效率等等，尤其是感受态，买的感受态效率比较低，最好用自己做的
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6楼2016-11-08 14:23:04
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
亲测   两个酶切位点挨着也能连上

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9楼2016-11-08 15:29:02
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议分步酶切，酶切后纯化一下再切切完胶回收。估计你原来的酶切不好。如果不确定酶好不好用，分2管做，2个酶不同顺序切，切完第一次电泳看看再切第二次。
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为什么
10楼2016-11-08 20:26:13
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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木兰8078: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-11-10 11:00:10
你可以分两步进行酶切，但是一定要注意几点：1.酶切质粒的总量不能够太多，否则酶切不完全是很正常的事情   2.酶切的时候需要多酶切多管，方便提高回收片段的浓度   3.酶切片段电泳的时候可以在凝胶上加上这个质粒，方便判断酶切完全是否
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体会生活
11楼2016-11-10 08:43:07
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普通回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)
你想多了，没这回事，两个酶切位点挨着也能切开

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2楼2016-11-07 16:20:03
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木兰8078

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-11-07 18:28:10
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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4楼2016-11-07 18:51:42
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

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可能有的质粒没切开~转化的时候环状质粒进去了，还有就是没连上
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···
5楼2016-11-08 10:32:43
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plu3263

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一个酶切完了 回收 再用另外一个切
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7楼2016-11-08 14:42:59
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13781258551

新虫 (初入文坛)
酶和底物的比例

发自小木虫IOS客户端
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8楼2016-11-08 15:19:14
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