24小时热门版块排行榜    

查看: 1774  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chase1024

木虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增基因酶切位点丢失 已有2人参与

目的基因2600bp(无酶切位点)已连接至T载,上游引物59bp(带有酶切位点和RBS序列),下游引物30bp(带有酶切位点),扩增目的基因连接pMD19(simple),转化,菌落PCR验证,挑取阳性转化子送测序,测序结果显示只有目的基因(ATG开始,TAA结束),酶切位点均缺失,提取质粒酶切验证也不行,请问各位大神这是什么原因导致的?感激不尽。。。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chase1024

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 青蛙快飞 at 2016-10-29 22:18:08
感觉只是你酶切可能出问题,测序你是用正反向引物加设计引物拼接得到的结果吧?不然怎么刚好是你目的序列。

谢谢你的回复,测序引物是T载通用引物,酶切过程好像也没什么问题,就是很奇怪了为什么正好是我的目的片段
9楼2016-10-30 00:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

点点滴star

新虫 (初入文坛)

感觉就是没杂交上啊,是不是引物与探针出问题了

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-29 16:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chase1024

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 点点滴star at 2016-10-29 16:12:38
感觉就是没杂交上啊,是不是引物与探针出问题了

谢谢你的回复,以前我也做过此类实验,只不过目的片段只有750bp,每次测序结果都是正确的,也能切开,感觉找不到原因。
3楼2016-10-29 16:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

点点滴star

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chase1024 at 2016-10-29 16:36:37
谢谢你的回复,以前我也做过此类实验,只不过目的片段只有750bp,每次测序结果都是正确的,也能切开,感觉找不到原因。...

有时实验就这样,出不来结果,也找不到原因,加油 再多做几次试试吧

发自小木虫Android客户端
4楼2016-10-29 17:08:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见