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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by WilliamHJ at 2016-10-26 17:46:52
有可能制胶不均匀，其他人的电泳图也是这个样子吗？

哈，最近只有我在做，时好时坏。大家意见很统一啊，看来确实是胶的问题，我重新制胶吧！
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11楼2016-10-26 17:51:33
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-27 22:14:31
marker跟你的样品跑出来差不多，不是样品处理的问题，应该是跑胶和制胶的问题
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···
12楼2016-10-27 08:52:58
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 东东饭先森 at 2016-10-26 15:26:48
以我多年跑图经验，应该就是制胶不均匀，溶胶时你在正常比例上多加10 ml TAE，然后溶2分钟，在旁边看着注意不要溢出。这样跑的图绝对美美哒

制胶2min，还是不行呢
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13楼2016-10-27 11:50:32
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zhangcarlm

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Ivy尘: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2016-10-28 20:24:27
这个也有可能是电泳液的事，我隔壁实验室发生过。你可以换个别人的TAE试试。
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14楼2016-10-27 13:54:54
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原味儿棒棒糖

新虫 (初入文坛)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-10-27 22:14:47
把电泳液换成新的，降低上样量，这种孔一般30uL就可以了，如果想多上样可以换用切胶回收的大孔或用透明胶带把挨着的几个孔连起来，最后，胶要煮的澄清透亮似清水，时间可以根据胶的变化定，不一定1min，

发自小木虫Android客户端
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15楼2016-10-27 14:49:11
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原味儿棒棒糖

新虫 (初入文坛)
2min，打错了

发自小木虫Android客户端
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16楼2016-10-27 14:49:46
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匿名

用户注销 (正式写手)
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 20:45:21
Ivy尘: 金币+2, ★★★很有帮助 2016-10-28 20:24:52
本帖仅楼主可见
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17楼2016-10-27 16:34:52
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he-路路

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是跑胶的电压不稳定，我们实验室前段时间也遇到过类似问题
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.......
18楼2016-10-27 16:43:08
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by he-路路 at 2016-10-27 16:43:08
有可能是跑胶的电压不稳定，我们实验室前段时间也遇到过类似问题

biorad的应该电压问题不大
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19楼2016-10-27 18:49:07
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by luozie at 2016-10-27 16:34:52
看图（主要是看marker）应该是制胶的问题，胶的浓度要合适，marker提供商都有叫浓度使用指导的，制胶时胶槽要放置水平；冷却时间要充足；把你的制胶方法说一下，我分析一下。

多谢！
胶浓度一般1%-1.2%。一般0.36g（biowest）配30ml，煮沸两次。很烫的时候就倒板了。对了，我不在胶里加染料的，在loading buffer里加。

昨天看了大家的建议，我多加了10ml的无菌水，沸2min，稍冷5min，倒板。但是结果还是一样。

您提到制胶时胶槽要放置水平，我的平面可能稍有倾斜，但不会很明显。
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20楼2016-10-27 18:55:24
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