| 查看: 2690 | 回复: 8 | |||
[交流]
高效液相色谱中接的制备柱，进样量与出峰时间有关系吗？ 已有5人参与
|
|
我在使用制备柱的时候遇到了一个问题，随着进样量增加，分离会变差（这个是正常现象，可以理解），为什么出峰时间会提前？ 发现这个情况的具体过程如下： 首先按照正常C18反相（4.6*250，5um）的色谱条件（梯度，起始有机相比例35%）下主成分18min出峰，目标14min出峰; 制备柱为10*250,10um 岛津的液相，走的单泵，当浓度为5mg/ml，进样量为100ul时，有机相比例50%可以得到很好的分离，目标出峰时间15min； 当进样量为600ul时，出峰时间变为10min，分离度差，因此改有机相比例为40%，目标出峰时间17，得到很好分离； 当浓度提高为15mg/ml时，进样量600ul，出峰时间变为12min，且杂质与主成分连成一片无法分离。 另外还有一个问题，我在一个能分离的条件下对流出的样品进行了接样，想看下纯不纯，然后发现两个挨着流出的杂质，在正常检测方法中出峰时间相差非常大！ 举个例子：17min接样，检测到的杂质A，出峰时间为14min（此时有机相比例35%）；18min接样，检测到杂质B，出峰时间46min（此时有机相比例75%），杂质B正常情况下在低比例有机相下是洗脱不出来的 PS：在这几个进样量下，主成分都是满载的，目标杂质峰高最高会1500mv的样子。 想请教各位大神，这种制备柱与普通的C18反相柱有什么区别？尤其是在分离原理上，有什么不一样的地方吗？为什么进样量会对出峰时间有这么大的影响？为什么不应该出来的杂质出来了？ |
回复此楼» 猜你喜欢
基金申报
已经有5人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有7人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有17人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有8人回复
-
疑惑？
已经有5人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有5人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- [HPLC常见问题]鬼峰、基线漂移、拖尾、分叉峰、保留时间漂移、柱压过高等系列问题
已经有54人回复
- 消除催化零回复，感谢虫友来交流(十一）
已经有5人回复
- 2014年度浙江省自然科学基金拟资助项目清单
已经有14人回复
- 【原创】2010与2005班药典不同以及新增内容一部二部
已经有6人回复
- 【资源】高效液相色谱仪操作三要点
已经有76人回复
- 【资源】液相色谱常见问题及处理方法
已经有43人回复
- 【资源】高效液相色谱仪使用遇到的问题
已经有24人回复
- 【专题】高效液相色谱仪使用遇到的问题
已经有36人回复
- 【分享】各仪器对送检样品的要求【已搜索无重复】
已经有3人回复
远与近
铁杆木虫 (著名写手)
- ACI: 1
- 应助: 76 (初中生)
- 金币: 3366.6
- 红花: 61
- 帖子: 1023
- 在线: 234.9小时
- 虫号: 2063328
- 注册: 2012-10-15
- 性别: GG
- 专业: 药物分析
2楼2016-10-24 09:20:49
superyeast
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +965 - ACI: 2
- 应助: 967 (博后)
- 贵宾: 0.641
- 金币: 17448.9
- 散金: 1200
- 红花: 206
- 帖子: 3316
- 在线: 312.8小时
- 虫号: 3322402
- 注册: 2014-07-14
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
- 管辖: 分析
3楼2016-10-24 10:09:15
4楼2016-10-24 15:21:21
5楼2016-10-24 15:23:24
6楼2016-10-24 16:28:19
柳絮虫
新虫 (职业作家)
- 应助: 347 (大学生)
- 金币: 1662.9
- 红花: 69
- 帖子: 3005
- 在线: 315.6小时
- 虫号: 4465824
- 注册: 2016-03-04
- 专业: 植物资源学
7楼2016-10-24 17:28:11
8楼2016-10-26 12:24:25
9楼2016-11-02 11:01:33